X-α-gal 5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷

產(chǎn)品簡介：

X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物。X-α-Gal的使用，避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍(lán)色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。X-α-Gal可用來區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同物種以及劃分乳酸菌和雙歧桿菌。組織學(xué)研究中，X-α-Gal還可借助光學(xué)顯微鏡來檢測組織的α-半乳糖苷酶活性。

利用α-半乳糖苷酶水解二糖-蜜二糖作為碳源，酵母菌得以正常生長或進(jìn)行發(fā)酵。釀酒酵母菌內(nèi)，該酶由幾種GAL基因調(diào)控的MEL1基因所編碼。一旦GAL4激活，α-半乳糖苷酶分泌，之后水解培養(yǎng)基上的X-α-Gal，使得菌落產(chǎn)生藍(lán)斑。酵母雙雜交研究用的工程菌包括AH109，PJ69-2A，Y190和Y187。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO：107021-38-5

2）化學(xué)名：5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；X-α-D-Galactoside X-α-D-半乳糖苷；

3）分子式：C14H15BrClNO6

4）分子量：408.64g/mol

5）純度：≥98%（TLC）

6）外觀：白色或近白色結(jié)晶粉末

7）溶解性：溶于DMF（20 mg/ml）

8）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。

產(chǎn)品使用：

方法1：直接倒入固體培養(yǎng)基

1. 溶解60mg X-α-gal于3ml DMF得20mg/ml儲存液，馬上使用或者避光儲存于-20℃，6個月穩(wěn)定；

2. 將高壓滅菌好的瓊脂培養(yǎng)基于室溫冷卻至50℃；

3. 按照每升培養(yǎng)基加入1ml 20mg/mlX-α-gal儲存液的用量，直接加入冷卻好的瓊脂培養(yǎng)基；【若有需要，此時也可加入篩選用的抗生素】；

4. 倒平板，使用前必須讓培養(yǎng)基室溫凝固（通常至少需30min）。

方法2：涂布于預(yù)制培養(yǎng)平板上

1. 溶解24mg X-α-gal于6ml DMF得4mg/ml儲存液，馬上使用或者避光儲存于-20℃，6個月穩(wěn)定；

2. 超凈工作臺內(nèi)放置已經(jīng)倒好的固體培養(yǎng)基，使其表面干燥；

3. 吸取200μl (15cm平板) 或100μl（10cm平板）4mg/ml X-α-gal 儲存液于預(yù)制培養(yǎng)平板上，并涂布使其均勻分散在表面【注意：平板邊緣通常很難得以充分涂布，可能導(dǎo)致假陽性克隆生成。建議條件可能下，于平板中央挑取克隆】。

4. 使用前將上述涂布好的篩選平板于超凈工作臺內(nèi)，至少晾干30min；

5. 將轉(zhuǎn)化好的細(xì)菌或酵母涂于平板上，分別置于37℃或30℃倒置培養(yǎng)，直至藍(lán)色菌落出現(xiàn)。

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。