Invivogen ant-bl-1  Blasticidin solution（10mg/ml）

Invivogen原裝產(chǎn)品，現(xiàn)貨供應(yīng)。

基本介紹：

Blasticidin S（殺稻瘟菌素），也稱為稻瘟散，滅瘟素S鹽酸鹽，從灰色鏈霉菌Streptomyces griseochromogenes分離到的一種核苷肽類抗生素。

作用機(jī)制：主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成。

Blasticidin S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素S具有快速而強(qiáng)效的作用模式，一個(gè)星期內(nèi)完成陽性克隆的篩選，且很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

抗性基因：

三種殺稻瘟菌素抗性基因已被克隆且測(cè)序：一種是乙酰轉(zhuǎn)移酶基因，來自殺稻瘟菌素產(chǎn)生菌的bls基因；另外兩種是脫氨酶基因（deaminase genes），分別為來自bacillus cereus蠟樣芽孢桿菌的bsr基因，和來自Aspergillus terreus土曲霉的BSD基因。bsr和BSD基因是最主要的選擇性標(biāo)記基因，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)。雖然bsr和BSD基因多用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的篩選標(biāo)記，但也可以用于E. Coli。

篩選濃度：

A、大腸桿菌（E. Coli）【常用濃度：25-100μg/ml】

E. Coli對(duì)Blasticidin敏感性很弱，但含Blasticidin抗性的轉(zhuǎn)化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基（pH 8.0），100μg/ml Blasticidin的條件下進(jìn)行篩選。高pH可增強(qiáng)抗生素篩選活性，為了達(dá)到最佳效果，推薦使用Invivogen公司的Fast-Media?Blas培養(yǎng)基聯(lián)合篩選。

B、哺乳動(dòng)物（Mammalian Cells）【常用濃度：1-10μg/ml】

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系Blasticidin的常用工作濃度范圍1-10μg/ml，少數(shù)情況高達(dá)30μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。

某些細(xì)胞系用Blasticidin進(jìn)行篩選的建議濃度：

實(shí)驗(yàn)步驟：

1）Blasticidin S通常使用濃度為1-10μg/ml，初次實(shí)驗(yàn)建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。

2）轉(zhuǎn)染48h后，用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代；（注：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作最好。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。分盤時(shí)覆蓋率最好不超過25%）

3）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含相同濃度Blasticidin的新鮮培養(yǎng)基；

4）7天后檢測(cè)細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

5）轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)盤。加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量控制：

濃度10mg/ml，每一批次都經(jīng)過嚴(yán)格檢測(cè)，確保每一批次間產(chǎn)品質(zhì)量連續(xù)穩(wěn)定。

純度：≥ 95% (HPLC)
內(nèi)毒素水平：<1 EU/mg
理化特性：pH7.5, 透明
細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)：用Blasticidin敏感和Blasticidin抗性哺乳動(dòng)物細(xì)胞系檢測(cè)產(chǎn)品活性
無細(xì)胞毒性痕量污染物：長(zhǎng)期培養(yǎng)Blasticidin抗性細(xì)胞確認(rèn)無細(xì)胞毒性 

保存：

4°C短期或-20°C長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融。