RIPA Lysis Buffer（strong）

RIPA 裂解液（強(qiáng)）

產(chǎn)品簡介：

RIPA裂解液是一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解液，對(duì)動(dòng)物細(xì)胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)的裂解作用，裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。

RIPA裂解液（強(qiáng)）的主要成分為50mM Tris-Hcl（pH7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及 sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用說明：

對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1、融解RIPA 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使 PMSF的最終濃度為1 mM。

2、對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中 的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。 用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有 明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

3、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度 非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對(duì)于組織樣品：

1、把組織剪切成細(xì)小的碎片。

2、融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使 PMSF的最終濃度為1mM。

3、按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分 可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5、充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠 狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況 下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可 以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測一些常見 的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

注意事項(xiàng)：

1、為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

2、需自備PMSF。

3、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。

4、可能需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索最佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

-20℃保存，一年有效。