Enhanced Potassium Green-2 AM

(Replacement of Asante Potassium Green-2 AM)

鉀離子指示探針

【溫馨提示】：見我司整理的鉀離子載體探針（Potassium ionophoresindicators）產(chǎn)品專題。

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。

產(chǎn)品簡介：

Enhanced Potassium Green-2 AM（EPG-2 AM）是Asante Potassium Green-2 AM（APG-2 AM）的替代物，

是一種具細(xì)胞膜滲透性的新型K+熒光探針，具有容易加載、緩慢泄露、良好光穩(wěn)定性和寬動力學(xué)范圍等理想特征，正好彌補傳統(tǒng)K+熒光探針PBFI AM（貨號：NBS7670）的缺陷。EPG-2 AM被可見光激發(fā)，最佳激發(fā)波長為517nm，但也能被傳統(tǒng)波長488nm激發(fā)檢測。雖然不是比率型探針，但其寬廣的動力學(xué)范圍使其甚至能檢測到變化很小的K+濃度。EPG-2 AM用近紅外波長的雙光子激發(fā)下信號很強且抗熒光淬滅很好。也適用于共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀和高通量篩選分析。

產(chǎn)品特性：

1） 分子式：C55H64Cl2N2O19

2） 分子量：1128.02 g/mol

3） 純度：＞ 80%（HPLC）

4） 最大激發(fā)波長：526 ± 3 nm（in methanol）

5） 最大發(fā)射波長：546 ± 3 nm（in methanol）

6） 解離常數(shù)（Kd）：18mM

7） 動力學(xué)范圍（Fmax/Fmin）：12

8） 溶解性：溶于DMSO

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，1年有效。

產(chǎn)品使用：（以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整。）

1.1 使用無水DMSO溶解EPG-2 AM（Mw：1128.02 g/mol）配制成1-5mM儲存液，比如往50μg EPG-2 AM凍干粉內(nèi)加入22μl DMSO，充分溶解后配制成2mM儲存液。-20oC分裝干燥凍存，避免反復(fù)凍融。

1.2 通常在含適當(dāng)濃度AM探針的無血清培養(yǎng)基中實現(xiàn)探針加載。建議正式實驗前向加載培養(yǎng)基內(nèi)加入Pluronic F-127以促進(jìn)AM探針的分散?？捎?span>DMSO配置20% Pluronic F-127儲存液或其他濃度，只需在正式實驗前將其與EPG-2 AM儲存液混合，然后加入加載培養(yǎng)基，保證其終濃度＜0.1%（w/v）。

1.3 室溫或37℃孵育細(xì)胞（可能在室溫的探針加載質(zhì)量會高些），孵育濃度通常為1-10μM，孵育時間通常為30-60min，具體的請根據(jù)實際情況或參考文獻(xiàn)資料。

1.4 【可選】對于大分子量AM探針（分子量≥1000g/mol），孵育結(jié)束，加入不含AM探針的細(xì)胞加載培養(yǎng)基額外孵育20-60min，以確保細(xì)胞將AM基團完全去酯化。

1.5 用不含血清和探針的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞至少一次，以降低細(xì)胞外背景熒光。

1.6 最后用合適的儀器來檢測熒光信號。檢測用最大激發(fā)波長517nm，最大發(fā)射波長540nm。

【注意】：

a) 如果細(xì)胞加載培養(yǎng)基是以碳酸氫鈉為緩沖體系，那么加載需要含5% CO₂的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行，以防止因CO₂損失引起的培養(yǎng)基堿化。

b) 如果細(xì)胞加載培養(yǎng)基含血清，那需適當(dāng)提高AM探針工作濃度，以補償因AM探針與血清蛋白結(jié)合引起的損失。

c) 某些情況下，對分子量接近或超過1000的AM探針，需用不含AM探針的細(xì)胞加載緩沖液進(jìn)一步孵育20-60min，以保證細(xì)胞內(nèi)酯酶能充分降解AM基團。

d) 探針的加載時間和濃度因具體的細(xì)胞類型而有差異，請根據(jù)具體的細(xì)胞類型來優(yōu)化。

e) 對每一種探針有必要通過校準(zhǔn)（calibration）來得到實際解離常數(shù)（Kd）。物理條件如溫度，pH，離子強度或溶液粘度，以及探針與細(xì)胞組成成分如蛋白質(zhì)的相互作用，都會影響Kd值。實際情況細(xì)胞內(nèi)的Kd比體外溶液通常要高。因此，細(xì)胞水平研究有必要進(jìn)行校準(zhǔn)確認(rèn)實際Kd值。

f) 對于EPG-2，雖然最大激發(fā)波長在517m，但其極強的熒光亮度使其能夠用標(biāo)準(zhǔn)的488nm濾片來激發(fā)，與Fluo系列的可見光鈣離子指示探針檢測手段一致。值得注意的是，488nm激發(fā)下得到的熒光強度約為最大激發(fā)波長下的40%。

注意事項：

1.      EPG-2 AM易受潮，粉末需干燥保存；粉末需用無水DMSO溶解，配制儲存液（如10mM），置于-20℃干燥避光保存，小量分裝避免反復(fù)凍融，至少3個月穩(wěn)定。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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