CoroNa Green, AM, Cell Permeant 鈉離子指示探針

【溫馨提示】：見我司整理的鈉離子載體/探針（Sodium ionophores/indicators）產(chǎn)品專題。

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強(qiáng)烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。

產(chǎn)品簡介：

CoroNa Green, AM是一種具細(xì)胞膜滲透性的鈉離子（Na+）指示探針。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，經(jīng)非特異性酯酶水解生成不具有膜滲透性的CoroNa Green，一旦與Na+結(jié)合，綠色熒光明顯增強(qiáng)，但波長發(fā)生很少變化。與其他Na+指示探針SBFI（貨號：NBS7676）和ENG-2（貨號：NBS7677、貨號：NBS7678）一樣，當(dāng)存在生理濃度的其他單價陽離子時，CoroNa Green允許從時間和空間上來選擇性分辨Na+濃度的變化。分子量更小的CoroNa Green（586），相比較于其他大分子量的Na+指示探針ENG-2（1087），在同等條件下，其膜滲透性的衍生物能更好的加載進(jìn)入胞內(nèi)。CoroNa Green能響應(yīng)更廣泛的Na+濃度范圍（見附圖II），Kd~80mM。不同于傳統(tǒng)的SBFI，與Na+結(jié)合后的CoroNa Green的最大吸收和發(fā)射波長分別是492nm和516nm，因此，兼容于任何能檢測熒光素（Fluorescein）的儀器，包括：流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀和熒光光度計。CoroNa Green是一款有價值的工具，用來分析細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的鈉離子水平。

產(chǎn)品特征：

1） 同義名：CoroNa Green acetoxymethyl (AM) ester

2） 分子量：657.62 g/mol

3） 純度：≥90%（HPLC）

4） 外觀：固體

5） 最大吸收/發(fā)射波長：492/516nm

6） 解離常數(shù)（Kd）：~80mM

7） 溶解性：DMSO

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

產(chǎn)品使用：（活細(xì)胞成像分析）

以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整。

1.1 儲存液準(zhǔn)備：于實(shí)驗(yàn)前，將低溫保存的CoroNa Green AM從冰箱取出平衡至室溫（至少20min），低速離心后再開蓋，直接往管內(nèi)加入高質(zhì)量的無水DMSO配制成1-10mM儲存液，比如：往50μg CoroNa Green, AM固體（Mw：657.62）加入15μl DMSO，充分溶解后配制成5mM儲存液。≤-20oC分裝干燥凍存，避免反復(fù)凍融。

1.2 工作液準(zhǔn)備：于實(shí)驗(yàn)前，用生理緩沖液比如：HHBS、HBSS或無血清培養(yǎng)基稀釋一定量的儲存液，使其工作濃度在0.5-10μM，初次使用務(wù)必摸索幾個梯度濃度的探針，以確認(rèn)適宜的工作濃度。工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 染色步驟：

1.4 熒光檢測：

注意事項(xiàng)：

1.       整個染色過程中需注意避光。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

應(yīng)用示例（來自文獻(xiàn)，僅做參考）

文獻(xiàn)1：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?span>Na+imaging）：胚胎（從桑椹胚至孵化期）用0.5μM CoroNa Green AM加載，37℃孵育30min。之后，用LSM 780共聚焦顯微鏡來測定胞內(nèi)和/或囊胚腔的熒光強(qiáng)度。激發(fā)和發(fā)射波長分別是488nm和510-520nm，相同實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。

文獻(xiàn)2：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模∟a+imaging）：小麥種子水培10天后，暴露于150mM NaCl溶液7天。之后加入CoroNa Green AM來觀察小麥根部細(xì)胞內(nèi)的Na+分布。小麥根部用含探針的染色工作液（20 μM CoroNa Green AM, 5 mM KCl, 5 mM Ca2+-MES, pH 6.1）避光孵育1h。用蒸餾水清洗染色部位。使用共聚焦成像儀（激發(fā)：488nm，發(fā)射：505-525nm）來觀察根部的分生組織區(qū)和成熟區(qū)。

Fig. Effects of salinity stress on Na+ and K+ homeostasis in a synthetic tetraploid wheat line and its diploid parents. (A,B) Na+ distribution in root cell indicated by CoroNa Green AM under salinity stress. (C–F) Na+ and K+ concentration. The seedlings were exposed to 150 mM NaCl for 7 days. The values are the mean (± SD) of three biological replicates. Different letters above the bar showed significant differences among wheat lines and treatments according to t-test (P < 0.05).

文獻(xiàn)3：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?span>Determination of intracellular potassium, sodium, and calcium）：于檢測前1h，取 2?ul 的2.5?mM CoroNa Green-AM (Na+) or PBFI-AM (K+) 儲存液加入1ml細(xì)胞溶液中，使其終濃度為5?uM。于檢測前30min，取4?ul的1mM Fluo-4加入1ml細(xì)胞溶液中。于37?°C, 7% CO₂ 中孵育細(xì)胞. 于流式分析前再加入PI使其工作濃度為10?ug/ml. 用裝有FACSDiVa 軟件的LSRII流式細(xì)胞儀進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。僅將碘化丙啶染色陰性的細(xì)胞進(jìn)行相對的胞內(nèi)離子濃度分析。

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