Coelenterazine Native 天然腔腸素

【溫馨提示】：見(jiàn)我司提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產(chǎn)品專(zhuān)題。 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發(fā)現(xiàn)的一種發(fā)光基團(tuán)（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲(chóng)熒光素酶（Obelia luciferase），和發(fā)光蛋白包括水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的構(gòu)成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，在此過(guò)程發(fā)射藍(lán)色光，光波長(zhǎng)在450~480nm。而甲蟲(chóng)（或螢火蟲(chóng)）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統(tǒng)不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時(shí)發(fā)光，光波長(zhǎng)在550-570nm。正由于生物發(fā)光信號(hào)和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯(lián)合用于多重轉(zhuǎn)錄報(bào)告基因研究，或用作Fluc系統(tǒng)內(nèi)螢火蟲(chóng)熒光素酶轉(zhuǎn)染的內(nèi)參。

腔腸素應(yīng)用甚是廣泛，包括：1）活細(xì)胞或組織的鈣離子檢測(cè)；2）細(xì)胞或組織的超氧化物和過(guò)氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學(xué)發(fā)光檢測(cè)；3）基因報(bào)告基因檢測(cè)；4）動(dòng)物活體檢測(cè)；5）ELISA和生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）。

天然腔腸素（Coelenterazine Native）是自然界中存在最豐富的一種腔腸素，也是目前應(yīng)用最普遍的一種標(biāo)準(zhǔn)底物。不僅是天然水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的發(fā)光基團(tuán)，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等的作用底物。還可用于生物共振能量轉(zhuǎn)移BRET，細(xì)胞或組織內(nèi)的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

產(chǎn)品特性：

1） CAS NO：55779-48-1

2） 化學(xué)名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3） 同義名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; 腔腸素游離酸；

4） 分子式：C26H21N3O3

5） 分子量：423.46 g/mol

6） 純度：>95%

7） 外觀(guān)：黃色至棕黃色結(jié)晶性粉末

8） 溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，且保存于惰性氣體內(nèi)。至少一年有效。

產(chǎn)品使用：

一、 腔腸素工作液制備

【有關(guān)腔腸素溶解的注意事項(xiàng)】：

1）腔腸素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔腸素的水溶性相對(duì)比較低，一般情況需先將腔腸素溶于酸化的醇類(lèi)溶劑配成相對(duì)高濃度的母液，然后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2）腔腸素在溶液中的穩(wěn)定性比較低，最好于正式實(shí)驗(yàn)前才配制溶液（包括高濃度母液）。但若實(shí)際要求，必須保存母液，目前來(lái)說(shuō)最穩(wěn)定的溶劑是丙二醇，往內(nèi)加入少量L-抗壞血酸，β-巰基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能維持其還原態(tài)。不過(guò)，還原劑可能會(huì)減低氧化腔腸素（氧化為Coelenteramide）的動(dòng)力學(xué)速率。也有可能破壞熒光素酶活性。而凍存在醇類(lèi)溶劑中可能引起腔腸素沉淀，實(shí)際取決于溶液濃度。當(dāng)然，可通過(guò)加熱50-60℃，使得沉淀重新溶解。必須確保無(wú)可見(jiàn)沉淀，或在實(shí)驗(yàn)前（特別是活體動(dòng)物）離心去沉淀。

1.1 腔腸素母液制備

將低溫保存的腔腸素粉末置于室溫回溫至少20min，低速離心后。往500μg天然腔腸素內(nèi)加入98μl 酸化的甲醇溶液（100%甲醇中含有20μl/ml 3M或者6M HCl），配制成12mM（~5mg/ml）腔腸素母液。≤-20℃（最好-80℃）分裝避光保存，可能會(huì)有少量活性的喪失，約保存4周。若存放在惰性氣體內(nèi)科延長(zhǎng)保存周期。

1.2   腔腸素工作液制備

直接用去氣蒸餾水（degased distilled water），PBS或者其他類(lèi)型生理緩沖液稀釋?，F(xiàn)配現(xiàn)用?？芍苯佑貌缓?span>Ca²⁺/Ma²⁺的PBS將12 mM的儲(chǔ)存液稀釋到2mM（~1 mg/ml）的工作液，+4°C避光短暫存放。若是體外實(shí)驗(yàn)，需要使用前回至室溫。

附錄1 天然腔腸素及其衍生物的光譜特性：

附錄2天然腔腸素及其衍生物的應(yīng)用差異：

注意事項(xiàng)：

1.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）最好以完全凍干粉的狀態(tài)保存在惰性氣體內(nèi)，密封后置于-20℃或-70℃長(zhǎng)期避光保存。管內(nèi)即使有微量空氣，也會(huì)隨著時(shí)間慢慢氧化腔腸素使其活性喪失。由此，不同組間的定量結(jié)果可能顯得不可靠，數(shù)據(jù)可比性不高。

2.      腔腸素（Coelenterazine， CTZ）不建議以?xún)?chǔ)存液的形式保存，最好于實(shí)驗(yàn)前配制新鮮的溶液。不建議將配好的腔腸素溶液儲(chǔ)存在-20℃或-70℃，因其具有一個(gè)高能量的二氧雜環(huán)丁酮環(huán)形結(jié)構(gòu)，即使在低溫條件下都會(huì)自發(fā)降解。若是必須配成液體儲(chǔ)存液，請(qǐng)按照操作步驟一、腔腸素工作液制備執(zhí)行。

3.      體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，推薦使用我司特別開(kāi)發(fā)和優(yōu)化的注射用天然腔腸素（Injectable native Coelenterazine）（貨號(hào)：NBS5919）或注射用腔腸素h（Injectable h-Coelenterazine）（貨號(hào)：NBS5921）。

4.      商業(yè)化腔腸素的種類(lèi)繁多，有天然腔腸素，以及各種腔腸素衍生物（比如，腔腸素h，腔腸素400a，腔腸素e，腔腸素f，腔腸素hcp）。它們對(duì)鈣離子的親和力，光譜特性，以及應(yīng)用傾向上會(huì)有差異，詳見(jiàn)附錄1—天然腔腸素及其衍生物的光譜特性，附錄2—天然腔腸素及其衍生物的應(yīng)用差異選擇適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品。

5.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。