C-Laurdan 脂膜熒光探針

產(chǎn)品簡介：

6-十二烷酰基-2-[N-甲基-N-(羧甲基)氨基]萘（6-dodecanoyl-2-[N-methyl-N

-(carboxymethyl)amino]naphthalene,C-laurdan），是廣泛使用的脂膜熒光探針Laurdan（NBS5115-5mg）的羧基衍生物，與母本化合物相比，對膜極性具更高的靈敏度，更明亮的雙光子熒光成像，且更準(zhǔn)確的反映細(xì)胞環(huán)境。

C-laurdan攜帶的羧基基團(tuán)發(fā)生局部離子化，賦予探針更好的水溶性和快速插入膜內(nèi)。作為一款極性敏感的脂膜探針，適用于脂筏（Lipid rafts）成像和細(xì)胞膜成像。應(yīng)用于膜極性的單光子和雙光子熒光成像。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO.：959839-06-6

2）化學(xué)名：N-Methyl-N-[6-(1-oxododecyl)-2-naphthalenyl]glycine

3）分子式：C25H35NO3

4）分子量：397.56

5）純度：≥95%

6）外觀：固體

7）溶解性：溶于DMF (100mM)、DMSO（20mM）、乙醇（10mM）

8）熒光：λex/ λem =348/423 nm

【注意】：雙光子激發(fā)光譜=780nm。單光子最大激發(fā)和發(fā)射波長分別是：348nm和423nm。

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥延長保存，2年有效。 

產(chǎn)品使用：

一、 儲存液制備

將低溫保存的C-Laurdan（Mw: 397.56）置于室溫回溫至少20min，低速離心后加入一定量的DMF或DMSO配制成適量濃度的母液，比如20mM（往2mg粉末加入251 μl DMSO，充分溶解即可）。根據(jù)單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光干燥保存（-20℃ 1-2個月內(nèi)使用；-80℃保存3-6個月內(nèi)使用）。需注意溶液內(nèi)濕度的逐漸積累會隨著時間引起探針聚集，從而務(wù)必干燥保存儲存液。

二、 染色工作液制備

用HHBS、HBSS、不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基等稀釋C-Laurdan儲存液到適宜的工作濃度，比如：5-50μM。最佳的工作濃度需自行優(yōu)化。染色工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

三、應(yīng)用示例（來自文獻(xiàn)，僅做參考）

文獻(xiàn)1：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?span>C-Laurdan用來觀察膜重組（Membrane organization）。

實(shí)驗(yàn)方法：染色流程：a）HUVECs細(xì)胞爬片接種在4孔板內(nèi)，用1：1000的CpdG或DMSO處理24h。b）成像前，去除舊培養(yǎng)基，更換不含FBS的EGCM2培養(yǎng)基，加入C-Laurdan染料使其工作濃度為5μM，加載30min。c）細(xì)胞用PBS清洗2次，用4% PFA室溫固定10min。d）吸走PFA，細(xì)胞用PBS清洗2次。d）蓋玻片封片。用Leica Stellaris 8 Falcon/DLS倒置熒光顯微鏡進(jìn)行成像。使用405nm激發(fā)光源，發(fā)射光譜分別是415-460nm和470-530nm。用ImageJ軟件計(jì)算廣譜偏振（GP）。

文獻(xiàn)2）Ballweg, S., Sezgin, E., Doktorova, M. et al. Regulation of lipid saturation without sensing membrane fluidity. Nat Commun 11, 756 (2020). https://doi.org/10.1038/s41467-020-14528-1

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>：C-Laurdan用來測定脂質(zhì)包裝（Lipid packing）。

實(shí)驗(yàn)方法：染色流程：333.3?μM脂質(zhì)與稀釋于150μl 50mMHEPES pH 7.4, 150?mM NaCl, 5 %(w/v) 甘油的0.4 μM C-Laurdan混合。樣本用375nm激發(fā)，記錄從400-600nm的發(fā)射光譜?？瞻仔Ｕ脑?，使用不含C-Laurdan的樣品記錄相同范圍內(nèi)的光譜。GP值（理論范圍從+1（基本有序）到-1（基本無序），通過測定400-460nm（ICh1）和470-530nm（ICh2）范圍內(nèi)的熒光強(qiáng)度來計(jì)算。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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