X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

X-Gal，英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside，中文全名5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，CAS NO：7240-90-6，是β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）的組織化學(xué)顯色底物，能被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-羥基吲哚。5-溴-4-氯-3-羥基吲哚是一種可溶、無(wú)色的吲哚水解產(chǎn)物，隨后通過(guò)二聚合和氧化反應(yīng)，被轉(zhuǎn)化為一不可溶藍(lán)色產(chǎn)物-5,5’-二溴-4,4’-二氯靛藍(lán)。

X-Gal是分子生物克隆實(shí)驗(yàn)中用來(lái)檢測(cè)β-gal活性的一種主流試劑，可用來(lái)檢測(cè)外源DNA是否插入質(zhì)粒DNA的lacZ區(qū)。當(dāng)外源DNA成功插入lacZ區(qū)，會(huì)破壞β-gal的α-互補(bǔ)，導(dǎo)致其活性喪失，則無(wú)法水解X-Gal使得菌落呈白色。而保留β-gal正?；钚缘募?xì)菌能產(chǎn)生藍(lán)色菌落。許多其它應(yīng)用也常將X-Gal用作底物來(lái)檢測(cè)β-gal活性，這些應(yīng)用包括：1）β-gal-抗體連接的免疫分析和免疫組化；2）基于β-gal誘導(dǎo)的大腸桿菌噬菌體檢測(cè)；3）腫瘤進(jìn)展微轉(zhuǎn)移形成的檢測(cè)。

X-Gal常常與IPTG（貨號(hào)：NBS2005-1g）聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選。本品達(dá)分子生物學(xué)級(jí)別。

基本特性：

1）CAS NO：7240-90-6

2）英文同義名：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside; X-b-D-Galactoside; BCIG;X-Gal;

3）分子式：C14H15BrClNO6 

4）分子量：408.63 g/mol

5）純度：≥99%

6）外觀(guān)：白色至類(lèi)白色或無(wú)色粉末

7）溶解性：溶于DMF（20mg/ml），DMSO

8）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。

產(chǎn)品使用：

1. X-Gal儲(chǔ)存液配制

稱(chēng)取0.2g X-Gal裝入15ml離心管，加入10ml DMF，震蕩使其充分溶解。按照1ml/管分裝，并用鋁箔紙包裹離心管使其避光，置于-20℃凍存，正常情況下6-12個(gè)月穩(wěn)定。

2. IPTG儲(chǔ)存液配制

稱(chēng)取0.238g IPTG（貨號(hào)：NBS2005-1g）溶于10ml去離子水中，充分溶解混勻后，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，即得到100mM（100×）的儲(chǔ)存液。按照1ml/管分裝，置于-20℃凍存，高達(dá)一年穩(wěn)定。

3. 藍(lán)白斑篩選方法

X-Gal常與IPTG聯(lián)合使用進(jìn)行藍(lán)白斑克隆篩選。

方法1：X-Gal、IPTG加入固體培養(yǎng)基（推薦）

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右；

2）每ml培養(yǎng)基內(nèi)加入10μl 20mg/ml X-gal溶液、10μl 100mM IPTG（使其終濃度達(dá)到1mM）；

3）加入適量篩選抗生素如氨芐青霉素，卡那霉素，羧芐青霉素等；

4）混勻后倒板，置于無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)使培養(yǎng)基凝固（通常需要30min）。

【注意】：藍(lán)白斑篩選用的平板請(qǐng)置于4℃避光保存，1周穩(wěn)定。

5）將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái)，于37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜，觀(guān)察藍(lán)白斑情況。

方法2：X-Gal、IPTG直接涂布平板表面

1）于無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥倒好的平板；

2）加120μl 20mg/ml X-gal溶液、40μl 100mM IPTG到平板表面，并涂布均勻覆蓋整個(gè)平板；

3）于無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)干燥上述平板，至少需要30min；

4）將轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布到上述平臺(tái)，于37℃倒置培養(yǎng)過(guò)夜，觀(guān)察藍(lán)白斑情況。

注意事項(xiàng)：

1.      X-gal的首選溶劑為DMF。若使用DMSO作為溶劑，選擇相對(duì)新鮮且高質(zhì)量的DMSO極為重要，持續(xù)性的研究發(fā)現(xiàn)由于使用舊或低質(zhì)量DMSO造成很多問(wèn)題。建議大部分實(shí)驗(yàn)都用DMF作為溶劑。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。