細(xì)胞核（Cell Nuclear）熒光探針產(chǎn)品專題

細(xì)胞生物學(xué)和組織學(xué)研究中，細(xì)胞核染料/探針占據(jù)著極其重要的江湖地位，染料本身的功能是用來觀察細(xì)胞核和染色體，以及染色體帶型分析。然而通過應(yīng)用方式的多重變化，賦予其廣闊的應(yīng)用天地?；騿我患?xì)胞染色，比如碘化丙啶PI，常用做細(xì)胞周期分析或者細(xì)胞活力分析；或與其他細(xì)胞核染料，如Hochest 33342，根據(jù)其細(xì)胞膜滲透性的差異和染色特征不同，用來做凋亡檢測區(qū)分；或與其他特異性探針，如Annexin V，用來區(qū)分早，中晚期細(xì)胞；或與抗體染色結(jié)合，或與特定亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)熒光探針如線粒體選擇性探針Mitotracker，F-actin選擇性探針鬼筆環(huán)肽，以及自熒光蛋白如GFP，RFP結(jié)合使用，起到復(fù)染和定位功能。

根據(jù)染料是否細(xì)胞膜滲透性和應(yīng)用特征上的一些差異，我司將以下應(yīng)用頻率最廣的核酸探針做出分類，

1. 活細(xì)胞以及非固定組織的細(xì)胞核探針

具細(xì)胞膜滲透性的核酸探針可以最少預(yù)處理的方式對活細(xì)胞或組織進(jìn)行染色。核染色不僅能展示組織內(nèi)細(xì)胞的自然定位，且能通過細(xì)胞自發(fā)的生理過程如有絲分裂，凋亡來示蹤細(xì)胞核變化。

Hoechst 33342& Hoechst 33258 兩者都是藍(lán)色細(xì)胞核熒光探針（Ex=352nm，Em=461nm），可穿透完整細(xì)胞膜，作用機(jī)制在于嵌入雙鏈DNA小溝，一經(jīng)結(jié)合后釋放出強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。細(xì)胞毒性非常低，基本不會影響細(xì)胞功能。因此經(jīng)染色后的活細(xì)胞可注射進(jìn)入組織進(jìn)行發(fā)育變化的示蹤分析，或感染其他細(xì)胞種類的示蹤分析。Hoechst染料對細(xì)胞質(zhì)染色背景低。Hoechst染料通常用來區(qū)分凋亡細(xì)胞核的完整染色質(zhì)，也常同BrdU標(biāo)記結(jié)合使用，根據(jù)DNA染色定位細(xì)胞的基礎(chǔ)上來判斷和分析增殖細(xì)胞。

2. 固定細(xì)胞/組織的細(xì)胞核探針

2.1 DAPI

最經(jīng)典的核/染色體復(fù)染藍(lán)色熒光探針（Ex=364nm，Em=454nm），用以鑒定細(xì)胞核和觀察染色體條帶分型。DAPI選擇性結(jié)合雙鏈DNA，細(xì)胞質(zhì)染色的背景很低或幾乎沒有。和溴化乙錠EB相比，靶向雙鏈DNA的靈敏度高很多。DAPI本身熒光很弱，一經(jīng)DNA結(jié)合，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的藍(lán)色熒光。而且DAPI自身的弱熒光，不會同綠色或紅色標(biāo)記二抗或FISH探針發(fā)生交叉干擾。DAPI屬于細(xì)胞膜半滲透性的熒光探針，在高濃度的情況下，也能用在未固定細(xì)胞或組織切片染色。

2.2 PI 碘化丙啶

碘化丙啶（PI），可以說是細(xì)胞核和染色質(zhì)染色的首推紅色熒光染料。作為一種溴化乙啶類似物，嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光（Ex=540nm，Em=608nm）。PI不可透過完整細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對核染色。某些固定條件，PI高度選擇性進(jìn)行核染色。而有些細(xì)胞或組織需經(jīng)過RNase的簡單處理來達(dá)到特異核染色目的。碘化丙啶PI可作為綠色熒光探針或者標(biāo)記二抗的優(yōu)異復(fù)染探針。

2.3 7-AAD (7-Aminoactinomycin D) 7-氨基放線菌素D

7-氨基放線菌素（7-AAD）是一種細(xì)胞核紅色熒光染料，嵌入雙鏈DNA發(fā)生光譜遷移（Ex=488nm，Em=650nm），適合用于熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的多色染色。7-AAD幾乎不可透過完整細(xì)胞膜，隨著細(xì)胞凋亡、死亡發(fā)生，7-AAD的質(zhì)膜通透性逐漸增加。另，可穿透進(jìn)入經(jīng)過固定和透化處理的細(xì)胞，廣泛用于FACS，熒光強(qiáng)度雖低于PI，但是適合于FITC，PE同時檢測。7-AAD選擇性結(jié)合DNA GC富集區(qū)域，對多線染色體染色產(chǎn)生不同的條帶類型，并在染色體分帶研究中用于染色質(zhì)分析。

3. 染色體分帶（Chromosome-banding）熒光探針

3.1  7-氨基放線菌素（7-AAD）選擇性結(jié)合DNA GC區(qū)域，多線染色體和染色質(zhì)研究中經(jīng)染色產(chǎn)生不同的條帶類型。

3.2  DAPI，或?qū)?span>DAPI或Hoechst 33258 與非熒光DNA結(jié)合藥物聯(lián)合使用，可用于染色體分帶研究。DAPI還可用于高分辨率染色體核型分析。

3.3  Hoechst 33342選擇性結(jié)合DNA AT區(qū)域，幾乎或不會對細(xì)胞質(zhì)造成背景染色。常用于染色體分選（chromosome sorting），多變量分析（multivariate analysis）和染色體核型分析（karyotyping）。Hoechst染料常與色霉素A3（Chromomycin A3）聯(lián)合使用，通過雙激光流式檢測對人染色體進(jìn)行定量分類（雙變量流式核型分析）。