Aminophenyl fluorescein (APF) 氨基苯基熒光素

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

氨基苯基熒光素（APF）和羥苯基熒光素（HPF）是由T. Nagano開(kāi)發(fā)的兩種活性氧（Reactive oxygen species, ROS）指示劑，比H2DCFDA（DCFH-DA, DCFH）具更優(yōu)秀的特異性和穩(wěn)定性。APF和HPF顯示有限的非選擇性反應(yīng)，和相對(duì)較高的光誘導(dǎo)氧化抗性。APF和HPF具細(xì)胞膜滲透性，本身無(wú)熒光，直到與羥基自由基或過(guò)氧亞硝基陰離子反應(yīng)，還能與次氯酸陰離子反應(yīng)，產(chǎn)生強(qiáng)綠色熒光（Ex/Em，~490/515nm），可用熒光顯微鏡、高通量成像儀、熒光酶標(biāo)板或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

本品以粉末形式提供，可直接溶于DMF配制成5mM儲(chǔ)存液，常用工作濃度范圍1-10μM，需根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系或參考文獻(xiàn)進(jìn)行優(yōu)化。

產(chǎn)品特性

1）同義名：3'-(p-aminophenyl) fluorescein氨基苯基熒光素

2）分子式：C26H17NO5

3）分子量：423.42

4）純度：≥95%

5）Ex/Em：490/515nm

6）溶解性：溶于DMSO（10mM）、DMF（5mM）

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，至少1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

使用方法

一、儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的1mg粉末置于室溫回溫至少20min，之后加入472μl 無(wú)水DMF配置成5mM儲(chǔ)存液。充分溶解和混勻后，按照單次用量分裝，-20oC避光干燥保存，避免反復(fù)凍融。

【注】：APF能溶于DMSO（10mM），但有數(shù)據(jù)顯示DMSO是羥基自由基的淬滅劑，會(huì)干擾檢測(cè)和降低靈敏性。因此，建議用DMF作為溶劑。

二、溶液體系檢測(cè)

正式實(shí)驗(yàn)前，取一管HPF儲(chǔ)存液置于室溫回溫，使其充分融解。之后用合適的緩沖液（比如HHBS緩沖液，PBS緩沖液）稀釋到所需的工作濃度。建議起始濃度為1-10μM，需根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)體系或參考文獻(xiàn)進(jìn)行優(yōu)化。

三、細(xì)胞體系檢測(cè)

以下實(shí)驗(yàn)步驟僅做參考，最佳的工作濃度、孵育時(shí)間和溫度需根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。在加入APF工作液之前按需處理細(xì)胞。

1）根據(jù)具體用量，將DMF儲(chǔ)存液用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液稀釋成1-10μM工作液。

2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)處理細(xì)胞（比如，RASM細(xì)胞用50-100nM 血管緊張素II處理3-5h）。

3）取步驟1）準(zhǔn)備的1-10μM工作液加入細(xì)胞，37oC孵育20-60min。

4）吸掉染色工作液，用HHBS或其他生理緩沖液替換。

5）用合適的熒光儀器（Ex/Em=492/515nm）來(lái)檢測(cè)。

【注1】：BSA和酚紅會(huì)影響熒光，需謹(jǐn)慎使用。

【注2】：HPF和APF能用于溶液體系或胞內(nèi)ROS檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1）APF和HPF僅用于科研研究，不可用于體外診斷研究。

2）APF和HPF產(chǎn)生的熒光相對(duì)于其他活性氧探針比如DCFH弱很多，這是探針本身的特性決定的（見(jiàn)附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對(duì)各種活性氧物質(zhì)的反應(yīng)特異性）。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

附表1 活性氧探針（HPF, APF, DCFH）對(duì)各種活性氧物質(zhì)的反應(yīng)特異性

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