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(NBS5891) BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH熒光探針

欄目:NoninBio
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(NBS5891)BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH熒光探針
貨號:NBS5891-1mg
品牌:NoninBio

 

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH熒光探針

 

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

價格

NBS5891-1mg

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

1mg

2978

【務(wù)必注意】:初次使用離子探針的用戶,強烈建議配合:Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養(yǎng)級(NBS2009-1g一起使用,以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。 

 

產(chǎn)品簡介:

BCFL AM是一種細胞膜滲透性的熒光探針,用來測定相對的胞內(nèi)pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的優(yōu)越替代物。與BCECF不同(至少由三種異構(gòu)體構(gòu)成的一種復(fù)合物,不同異構(gòu)體之間的比率因批次而異),BCFL是單一異構(gòu)體,具有更優(yōu)秀的結(jié)果重復(fù)性。BCFL具有與BCECF相同的光譜反應(yīng)(單波長測定λex/λem=490/535nm;或比率測定λex/λem=505/ 535nmλex/λem=430/535nm)(光譜特征見附錄I)。BCFL AM表現(xiàn)出pH依賴的雙激發(fā)性,pKa~7.0,以及一個激發(fā)交點(454nm)。BCFL AM的比率型成像使得胞內(nèi)pH測定基本不受幾種可變因素的影響,包括染料濃度、光徑、細胞泄露和光漂白率。

 

產(chǎn)品特性:

1  同義名:BCFLAM ester;BCFLAcetoxymethyl Ester;

2  分子量:~600

3  溶解性:溶于DMSO

4  Ex/Em503/528nm

 

保存條件

-20℃避光干燥保存,至少1年有效。

 

產(chǎn)品使用:

A、試劑準(zhǔn)備

1. 10% Pluronic F-127母液配制【可選】

a)將1g Pluronic F-127(貨號:NBS2009-1g溶于10ml去離子水,配制成10%w/v)母液。

b)溶解過程中于40~50℃內(nèi)加熱10% Pluronic F-127母液30min,使其完全溶解。

c10% Pluronic F-127母液室溫保存,高達6個月穩(wěn)定,不要凍存。

2. HHBS Buffer或其他生理緩沖液

3. 丙磺舒(貨號:NBS2007-1g水溶性丙磺舒(貨號:NBS2008-154mg【可選】

B、操作步驟

【注意】:以下實驗步驟中用到非離子表面活性劑Pluronic F-127和有機陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑丙磺舒(Probenecid),這兩種試劑雖然都是非必需的,但強力推薦使用。

1. 制備BCFLAM母液:于實驗前,將低溫保存的BCFLAM粉末(Mw~600)置于室溫回溫至少20min。低速離心后加入高質(zhì)量無水DMSO配制成10~20mM母液。比如:1mgBCFLAM粉末加入166μl DMSO充分溶解,混勻后即得到10mM母液。多余的母液根據(jù)單次用量分裝,避光凍存,約3個月穩(wěn)定

2. HHBS或其他的生理緩沖液制備工作液(含10μMBCFLAM0.08%Pluronic F-127),比如,在合適的管子內(nèi)混合6.4μlBCFLAM10mM儲存液)和51.2μl 10%Pluronic F-127。之后,添加HHBS或其他生理緩沖液直到總體積為6.4ml。

【注意】:對于大部分的細胞系,建議BCFLAM的工作濃度為4~5μM。Pluronic F-127的終濃度建議為0.02~0.04%

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl細胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔內(nèi),混勻,使得BCFLAM的終濃度為5μMPluronic F-127的終濃度為0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室溫孵育30min。

5. 吸走200μl染色液,之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理緩沖液。

6. 添加化合物到檢測孔內(nèi)。之后通過熒光檢測來進行pH分析。

【單波長檢測:Ex/Em=490/535nmcutoff=515nm);或比率測定

Ex/Em=505/535nm430/535nmcutoff=515nm)】

 

注意事項:

1.      熒光染料都存在淬滅問題,操作或保存過程中盡量避光,減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

包裝規(guī)格

NBS5810-1mg

5-(and-6)-Carboxy SNARF-1, Acetoxymethyl Ester, Acetate

1mg

NBS5811-1mg

5-(and-6)-carboxy SNARF-1, Cell Impermeant pH熒光探針

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NBS5889-1mg

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1mg

NBS5890-1mg

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1mg

NBS5891-1mg

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

1mg

NBS5892-1mg

BCFL Acid (Superior replacement for BCECF Acid)

1mg