SYTOX Green Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

死細(xì)胞綠色熒光核酸染料

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SYTOX Green核酸染料（SYTOX Green Nucleic Acid Stain），是一種高親和力的核酸染料，輕易滲透進(jìn)入受損的細(xì)胞質(zhì)膜，但不能穿透活細(xì)胞膜。特別適用于革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-），由于它們需要極其明亮的熒光信號(hào)。探針只需簡(jiǎn)單孵育，使用氬離子激光器的488nm激光或任何其它450-490nm光源激發(fā)，死細(xì)胞的核酸則呈明亮的綠色熒光。結(jié)合以上特征，以及熒光增強(qiáng)＞500倍（與核酸結(jié)合）的優(yōu)點(diǎn)，使其稱為一種簡(jiǎn)單、定量的一步法死細(xì)胞指示劑，當(dāng)用熒光顯微鏡、熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)板和流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

SYTOX Green核酸染料可與藍(lán)色和紅色熒光的表面標(biāo)記聯(lián)合使用，用于多指標(biāo)分析。也能將SYTOX Green與任一種具細(xì)胞滲透性的SYTO 59-64紅色熒光核酸染料聯(lián)合雙色標(biāo)記死細(xì)胞和活細(xì)胞。SYTOX Green是一種優(yōu)秀的DNA復(fù)染劑，用于染色體標(biāo)記以及固定細(xì)胞和組織的染色。

本品以DMSO儲(chǔ)存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進(jìn)行簡(jiǎn)單孵育即可。適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌。

產(chǎn)品特性

1） 同義名：SYTOX Greendye；SYTOX Green死細(xì)胞染料；死細(xì)胞染料綠菁；SYTOX Green細(xì)胞核染料；

2） 外觀：橙色至紅色溶液

3） 熒光特征：EX/Em=504/523nm（與DNA結(jié)合）

圖1.SYTOX Green與DNA結(jié)合的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜。于10mM Tris-HCl，1mM EDTA, pH 7.5的反應(yīng)體系內(nèi)，將1個(gè)染料分子與50個(gè)DNA堿基對(duì)結(jié)合之后檢測(cè)所得的光譜。

保存條件: 

20℃避光干燥保存，至少1年有效。

產(chǎn)品使用：(以下步驟僅用作示例以指導(dǎo)科研人員開(kāi)展自身細(xì)菌樣本的染色)

基于實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)和發(fā)表方法，建議使用廣譜的染色濃度來(lái)開(kāi)展使用，并且根據(jù)自身的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化摸索出最佳的工作濃度（見(jiàn)表1）。

使用塑料管來(lái)稀釋SYTOX染料，由于稀釋后的染料會(huì)粘附到玻璃上?？偟膩?lái)說(shuō)，用不含磷酸鹽的緩沖液來(lái)染色能得到最好的結(jié)果。塑料或玻璃器皿上殘留的去污劑也有可能影響許多細(xì)胞或有機(jī)體的真實(shí)染色，導(dǎo)致在含或不含細(xì)胞的溶液中都能看到發(fā)明亮熒光的材料。確保用溫和去污劑來(lái)清洗玻璃器皿，用熱自來(lái)水完全沖洗干凈，最后用去離子水清洗數(shù)次。

①離心收集細(xì)胞，用生理鹽溶液或水重懸細(xì)胞。貼壁細(xì)胞（比如：哺乳動(dòng)物細(xì)胞）可能在蓋玻個(gè)染料濃度，片上原位染色。使用表12內(nèi)建議的工作濃度進(jìn)行染色。初次實(shí)驗(yàn)，建議在建議濃度范圍內(nèi)做多,以確定能得到最佳染色的工作濃度。需要注意：生長(zhǎng)培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、是否存在其它細(xì)胞、和其它因素都可能影響染色。

②染色的真核細(xì)胞通常顯示出彌散的細(xì)胞漿染色和細(xì)胞核染色，特別是經(jīng)?？吹矫髁恋暮藘?nèi)小體染色。由于此染料具細(xì)胞膜滲透性，且中性pH下帶凈正電荷，也有可能染線粒體?；罱湍妇鷥?nèi)主要是線粒體染色。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

應(yīng)用示例：
文獻(xiàn)1：

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>利用二種熒光染料（CFW+ SYTOX green）雙重標(biāo)記來(lái)定量檢測(cè)孢子囊內(nèi)的游動(dòng)孢子含量。

實(shí)驗(yàn)方法：首先，用經(jīng)典的核酸染料DAPI（1 μg/ml?1）和特異性染色質(zhì)熒光素增白劑（calcofluor white , CFW, 2.5%v/v）。之后，結(jié)合核酸染料SYTOX green和CFW染色。SYTOX green的不同濃度（0.1 μM, 0.2 μM, 和0.5 μM）和孵育時(shí)間（30 min，1 h）進(jìn)行優(yōu)化。CFW工作濃度為2.5% (vol/vol) 。CFW要么與SYTOX green同時(shí)加入樣本，或觀察前5min再加入樣本。染色步驟和結(jié)果總結(jié)見(jiàn)圖1。最佳的染色條件是：先用0.1 μM SYTOX green孵育55min，再加入CFW共同孵育5min。 

Fig 1. Different concentration and incubation time procedures tested for double staining method and epifluorescence microscopy observation of zoosporic content and sporangia of phytoplankton parasitic chytrid. Optimal procedures are indicated with bold characters. Bars, 10 μm.

文獻(xiàn)2：
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>使用SYTOX Green和DAPI來(lái)評(píng)估細(xì)菌活力。
實(shí)驗(yàn)方法：用DAPI (10 μg/ml in Morse's Defined Medium)室溫避光標(biāo)記細(xì)菌20min；用標(biāo)記好的細(xì)菌感染24孔板內(nèi)貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，不要用醛或有機(jī)溶劑來(lái)固定細(xì)胞；用MOPS/MgCl₂清洗一次；用Alexa Fluor 647結(jié)合的抗體或凝集素標(biāo)記感興趣的細(xì)菌，室溫避光操作10min，來(lái)檢測(cè)外部細(xì)菌；吸走細(xì)胞培養(yǎng)基，加入SYTOX Green（0.4 μMin MOPS/MgCl₂）。室溫避光孵育5min。MOPS/MgCl₂清洗2次；MOPS/MgCl₂再清洗1次；于30min內(nèi)用熒光顯微鏡收集圖片。

Fig 2. (A-B) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to propidium iodide and SYTO9 as in protocol 1, with (A) or without (B) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to propidium iodide and appear red. Viable bacteria are stained with SYTO9 and appear green. (C-D) Mid-logarithmic phase N. gonorrhoeae was exposed to DAPI and SYTOX Green as in protocol 2, with (C) or without (D) isopropanol treatment to kill the bacteria. Nonviable bacteria are accessible to DAPI and SYTOX Green and appear blue + green. Viable bacteria are stained with DAPI only and appear blue only.

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