MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit MTT

細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

MTT也稱作溴化噻唑藍(lán)四氮唑，是一種黃色染料，已經(jīng)廣泛替代傳統(tǒng)的臺盼藍(lán)染色法或者放射性同位素插入法，用來檢測細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖以及毒性分析。MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細(xì)胞膜滲透性。活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M(jìn)入的MTT還原成為水不溶性的藍(lán)紫色MTT-甲臜結(jié)晶，而死細(xì)胞不具此功能。甲臜結(jié)晶不能穿透細(xì)胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細(xì)胞內(nèi)。在特定溶劑的作用下完全溶解甲臜結(jié)晶，然后通過酶標(biāo)儀測定570 nm附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

本MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）采用獨(dú)特的甲臜溶解液，能夠非常好的完全甲臜結(jié)晶，使檢測本底低、靈敏度高，且線性范圍寬。

保存條件: 

-20℃避光保存，1年有效。MTT溶液（5mg/ml）第一次使用亦可根據(jù)需要分裝后-20℃避光保存；甲臜溶解液亦可室溫保存。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：（以96孔板為例）

1. 收集對數(shù)生長期的細(xì)胞，用含血清的培養(yǎng)液配制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞密度，以每孔3000-10,000個細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積100μl，培養(yǎng)板的邊緣孔用無菌PBS填充。設(shè)置空白孔和對照孔。

【注①】：通常情況，細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加3000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加6000個細(xì)胞。具體每孔所用細(xì)胞數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞大小、增殖速度的快慢等來決定。

【注②】：需設(shè)置空白孔（不含細(xì)胞，含培養(yǎng)液、MTT和甲臜溶解液），對照孔（含細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT和甲臜溶解液），每組設(shè)置3個復(fù)孔。

2. 37℃，5% CO₂繼續(xù)培養(yǎng)或根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體需求進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6-24h。

3. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體需求，給予0-20μl干預(yù)藥物處理，37℃，5% CO₂繼續(xù)培養(yǎng)至合適時間。

4. 小心吸掉培養(yǎng)液，每孔加入100μl新鮮培養(yǎng)液，再加入10μl MTT溶液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。繼續(xù)培養(yǎng)4h。

5. 小心吸掉培養(yǎng)液，每孔加入110μl甲臜溶解液，置搖床上低速振蕩10min，使得結(jié)晶物充分溶解。可在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)晶物是否完全溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時間會短些；如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時間會長些。

6. 在酶標(biāo)儀上搖勻后，選擇570nm，測定吸光度。記錄結(jié)果，比色以空白調(diào)零。

【注①】：對于細(xì)胞毒性檢測，以未經(jīng)藥物處理細(xì)胞的OD值為100%，然后計算藥物處理細(xì)胞所占的比率（x），公式如下：OD（未經(jīng)藥物處理細(xì)胞）/OD（藥物處理細(xì)胞）=100%/x。然后建立直方圖。

注意事項(xiàng)：

1.      使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。①由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS、無菌水或培養(yǎng)液；②可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方以緩解蒸發(fā)。

2.      MTT溶液在低溫下會凝固，請置于室溫或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后再使用。

3.      MTT溶液需盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，若單次用量很少，建議根據(jù)需求分裝后置于-20℃保存。MTT溶液顏色如變?yōu)榛揖G色，請勿使用。

4.      甲臜溶解液當(dāng)置于-20℃保存需解凍使用，或室溫保存產(chǎn)生沉淀，可置于37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須全部溶解后混勻使用。

5.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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