BCA蛋白定量試劑盒（增強(qiáng)型）

產(chǎn)品簡介：

BCA 蛋白定量試劑盒（增強(qiáng)型）(Enhanced BCA Protein Assay Kit)根據(jù)常規(guī)BCA蛋白定量法研制升級(jí)而成，可 通過簡單操作在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行溶液的蛋白定量，測(cè)試靈敏度高、速度快、兼容性好。 與常規(guī)BCA蛋白定量試劑盒相比，本試劑盒靈敏度更高：檢測(cè)濃度下限為10μg/ml，最小蛋白檢測(cè)量為0.2μg。 與常規(guī)BCA蛋白定量試劑盒相比，本試劑盒顯色速度更快：相同的樣品孵育較短時(shí)間即可進(jìn)行吸光度測(cè)定。 本試劑盒在待測(cè)樣品蛋白濃度20-1500μg/ml范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。 本試劑盒兼容性好，待測(cè)樣品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween20、60、80，10mM的MEDTA，1mM的D TT，0.01%的β-巰基乙醇對(duì)測(cè)試結(jié)果不產(chǎn)生影響。

保存條件: 

室溫保存（1年有效）。

產(chǎn)品組成：

室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20oC凍存。

產(chǎn)品使用：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備

a. 用試劑盒內(nèi)提供的注射器，將整支蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一支蛋白標(biāo)準(zhǔn)安瓿瓶(25mgBSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，剩余的標(biāo)準(zhǔn)溶液請(qǐng)置-20oC長期保存。

b. 取適量25mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，用待測(cè)蛋白樣品的溶解液稀釋，至終濃度為0.5mg/ml。 注意：請(qǐng)確保用待測(cè)蛋白樣品的溶解液來稀釋標(biāo)準(zhǔn)品以達(dá)到最佳測(cè)試結(jié)果。若無法確定待測(cè)蛋白樣品的溶解液，則可以用0.9% NaCl 或PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)可以-20oC長期保存。

2. BCA工作液的配制

根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如 5ml BCA試劑A+100μlBCA試劑B，混勻后配制成5.1mlBCA工作液。

注意：配制好的BCA工作液可在室溫保存24小時(shí)。

3. 蛋白濃度檢測(cè)

a. 將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加不足20ul的標(biāo)準(zhǔn)品孔添加 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl，相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。

b. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足20μl，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)足到20μl。請(qǐng)注意記 錄樣品體積。

c. 各孔加入200μlBCA工作液，37oC放置20-30分鐘。

注意: 也可以室溫放置2小時(shí)，或60oC放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長不斷加深。并且顯色 反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或適當(dāng)延長孵育時(shí)間。

d. 用酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)或樣本A562，或540-595nm之間的波長的吸光度。

e. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和使用的樣品體積計(jì)算出樣品的蛋白濃度。

注意事項(xiàng)：

1.      低溫條件或長期保存出現(xiàn)沉淀時(shí)，可攪拌或 37℃溫育或微波幾十秒使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。

2.      樣品中若含有濃度較高的EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，請(qǐng)?jiān)囉?span>Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可用 TCA 沉淀去除干擾物質(zhì)。

3.      為得到精確的蛋白濃度結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔且標(biāo)準(zhǔn)品與樣品處理需盡量一致（如采用同樣 的溶液溶解樣品和標(biāo)準(zhǔn)品）, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.      當(dāng)試劑 A 和 B 混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后會(huì)消失。

5.      需準(zhǔn)備 37℃水浴或孵育箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計(jì)，測(cè)定波長為 540-595nm，562nm 最佳。酶標(biāo)儀需與96 孔酶標(biāo)板配套使用。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。

6.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品：