Cell-tracker CM-DiI/活細(xì)胞示蹤劑/ DiI改良探針/紅色熒光

CM-DiI基本描述：

CM-DiI（活細(xì)胞的多代示蹤、固定細(xì)胞長(zhǎng)期示蹤）

CellTracker CM-DiI為DiI的衍生物，在DiI中加入了具有中度巰基反應(yīng)特性的氯甲基取代物，后者能與細(xì)胞內(nèi)含巰基的肽和蛋白結(jié)合，使得CM-DiI能夠抵抗醛類的固定作用。CM-DiI在細(xì)胞固定、破膜及石蠟包埋的整個(gè)過(guò)程中均能很好的保留在細(xì)胞內(nèi)，因此，與傳統(tǒng)細(xì)胞膜探針DiI相比較，更適于固定后標(biāo)本的長(zhǎng)期示蹤。其紅色/綠色的光譜特征，使其可與綠色探針或者綠色熒光蛋白如GFP一起用于雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)。

 CM-DiI基本特性：

1） CAS NO：180854-97-1

2） 化學(xué)名：3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl

-1-octadecyl-, chloride

3） 分子式：C68H105Cl2N3O

4） 分子量：1051.5g/mol

5）  純度：≥95%

6）  外觀：紅色固體

7）  Ex/Em：553/570 nm（甲醇）

8）  推薦濾光器：Omega-XF32, Chroma-31002

9）  溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

10）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖： 

CellTracker CM-DiI具以下特征：

a）使用方便，只需吸掉培養(yǎng)液，加入探針，30min孵育，顯微成像；

b）熒光信號(hào)至少可持續(xù)72h以上（一般3-6代），染料只傳到子代細(xì)胞，不會(huì)染上鄰近細(xì)胞。

c）毒性很低，不會(huì)影響細(xì)胞增殖和活力。

總而言之，CellTracker CM-DiI具有良好的示蹤特征，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，穩(wěn)定長(zhǎng)效，染料很好保留在細(xì)胞內(nèi)，生理pH熒光信號(hào)強(qiáng)。

研究證實(shí)，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽(yáng)性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。

CM-DiI（改良探針）與DiI（傳統(tǒng)探針）在透化和非透化處理樣本的效果比較：【來(lái)自文獻(xiàn)Staffend NA, et al. DiOlistic labeling of neurons in tissue slices: a qualitative and quantitative analysis of methodological variations.Front Neuroanat. 2011 Mar 1;5:14.】

1、未透化組織DiI&CM-DiI標(biāo)記完整性的比較

結(jié)果顯示【見(jiàn)圖1&圖2】：兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標(biāo)記組織的全細(xì)胞檢測(cè)顯示，不管是即刻觀察，還是2周后觀察，染料完整性和圖片質(zhì)量都保持完整。對(duì)于樹(shù)突狀片段的結(jié)果染色結(jié)果一致。另外，通過(guò)分析樹(shù)突段的突棘密度來(lái)調(diào)查不同時(shí)間周期下染色穩(wěn)定性和完整性。對(duì)于DiI標(biāo)記的樹(shù)突段，不會(huì)時(shí)間段染色幾乎無(wú)差異。然而，CM-DiI標(biāo)記的樹(shù)突段，突棘密度封片2周后明顯增強(qiáng)。

圖1（左）. 非透化熒光染色組織的全細(xì)胞檢測(cè)。A）DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；B）DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；C）CM-DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；D）CM-DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；

圖2（右）. 非透化熒光染色組織的樹(shù)突片段檢測(cè)。A）DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；B）DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；C）CM-DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；D）CM-DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；

2、透化組織DiI&CM-DiI標(biāo)記完整性的比較

結(jié)果顯示【見(jiàn)圖3&圖4】：兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標(biāo)記組織封片后即刻檢測(cè)，不論是全細(xì)胞還是樹(shù)突段，結(jié)果都無(wú)明顯差異；兩種熒光探針（DiI和CM-DiI）標(biāo)記組織封片2周后檢測(cè)，不論是全細(xì)胞還是樹(shù)突段，CM-DiI標(biāo)記的穩(wěn)定性在熒光信號(hào)、光淬滅和最終圖片質(zhì)量上都強(qiáng)于DiI。

不管是即刻觀察，還是2周后觀察，染料完整性和圖片質(zhì)量都保持完整。對(duì)于樹(shù)突狀片段的結(jié)果染色結(jié)果一致。另外，通過(guò)分析樹(shù)突段的突棘密度來(lái)調(diào)查不同時(shí)間周期下染色穩(wěn)定性和完整性。對(duì)于DiI標(biāo)記的樹(shù)突段，不會(huì)時(shí)間段染色幾乎無(wú)差異。然而，CM-DiI標(biāo)記的樹(shù)突段，突棘密度封片2周后明顯增強(qiáng)。

圖3（左）. 透化熒光染色組織的全細(xì)胞檢測(cè)。A）DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；B）DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；C）CM-DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；D）CM-DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；

圖4（右）. 透化熒光染色組織的樹(shù)突片段檢測(cè)。A）DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；B）DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；C）CM-DiI標(biāo)記組織封片后馬上檢測(cè)；D）CM-DiI標(biāo)記組織封片2周后熒光檢測(cè)；

溫馨提示：對(duì)于不經(jīng)透化處理的樣本，只需用傳統(tǒng)的細(xì)胞膜熒光探針如DiI染色即可。對(duì)于后續(xù)需透化處理的樣本，推薦用改良探針如CM-DiI（貨號(hào)：NBS5237-50ug）進(jìn)行染色。

細(xì)胞膜探針光譜和檢測(cè)濾片：

應(yīng)用文獻(xiàn)：

1.  Hemmrich Ket al,Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering.Cells Tissues Organs. 2006; 184(3-4):117-27.

2.  Andrade W, et al, The use of the lipophilic fluorochrome CM-DiI for tracking the migration of lymphocytes.J Immunol Methods. 1996 Aug 14;194(2):181-9.

3.  Schatteman GC, et al,Blood-derived angioblasts accelerate blood-flow restoration in diabetic mice.J Clin Invest. 2000 Aug; 106(4):571-8.

4.  Foley-Comer AJ, et al, Evidence for incorporation of free-floating mesothelial cells as a mechanism of serosal healing.J Cell Sci. 2002 Apr 1;115(Pt 7):1383-9.

5.  Djouad F, et al,Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals.Blood. 2003 Nov 15;102(10):3837-44. Epub 2003 Jul 24.

6.  Hosie KA, et al,Chronic excitotoxin-induced axon degeneration in a compartmented neuronal culture model.ASN Neuro. 2012 Feb 23;4(1). pii: e00076. doi: 10.1042/AN20110031.

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