Cell-tracker CM-DiI 活細(xì)胞示蹤劑CM-DiI（紅色）

溫馨提示：

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CellTracker CM-DiI，CAS NO. 180854-97-1，DiI（DiIC18(3)）衍生物，在DiI結(jié)構(gòu)上加入了具中度巰基反應(yīng)性的CM氯甲基替代基團(tuán)，使其能與細(xì)胞內(nèi)含巰基的肽和蛋白結(jié)合，使其能抵抗醛類(lèi)的固定作用。不同于傳統(tǒng)的細(xì)胞膜探針PKH26和DiI，CM-DiI 在細(xì)胞固定、破膜及石蠟包埋的整個(gè)過(guò)程中均能很好的保留在細(xì)胞內(nèi)，因此，特別適合同時(shí)做細(xì)胞膜標(biāo)記以及后續(xù)的免疫組化、熒光原位雜交或電鏡觀察的分析實(shí)驗(yàn)。

CellTracker CM-DiI適用于細(xì)胞運(yùn)動(dòng)或定位的監(jiān)測(cè)，染料能很好維持，允許對(duì)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的多代示蹤研究。

具備以下特征：

a）使用方便，只需吸掉培養(yǎng)液，加入探針，30min孵育，顯微成像即可；

b）熒光信號(hào)至少可持續(xù)72h以上（一般3-6代），染料只傳到子代細(xì)胞，不會(huì)染上鄰近細(xì)胞；

c）毒性很低，不會(huì)影響細(xì)胞增殖和活力；

d）紅色激發(fā)/發(fā)射的光譜特性（Ex/Em=553/570 nm），適合同綠色熒光染料或蛋白聯(lián)合使用進(jìn)行多重標(biāo)記；

總而言之，CellTracker CM-DiI具有良好的示蹤特征：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒，穩(wěn)定長(zhǎng)效，染料很好保留在胞內(nèi)，生理pH下熒光信號(hào)非常強(qiáng)。

保存條件: 

-20oC干燥避光保存，有效期一年。

產(chǎn)品特性：

1）  CAS NO：180854-97-1

2）  化學(xué)名：3H-Indolium, 5-[[[4-(chloromethyl)benzoyl]amino]methyl]-2-[3-(1,3

-dihydro-3,3-dimethyl-1- octadecyl-2H-indol-2-ylidene)-1-propenyl]-3,3-dimethyl-1-octadecyl-, chloride

3）  分子式：C68H105Cl2N3O

4）  分子量：1051.5 g/mol

5）  純度：≥95%

6）  外觀：紅色固體

7）  Ex/Em：553/570 nm（甲醇）

8）  推薦濾光器：Omega-XF32, Chroma-31002

9） 溶解性：溶于DMSO，乙醇，DMF

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1） 儲(chǔ)存液制備：用DMF、 DMSO或乙醇配置濃度1-2mM的儲(chǔ)存液。例如，將50 μg CM-DiI （Mw：1051.5g/mol）溶于48 μl無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到1mM的儲(chǔ)存液。

【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融，且避光干燥保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或DPBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1-2 μM的工作濃度。

【注意】最佳的工作濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。

2. 細(xì)胞染色

1）于實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備好染色工作液；

2）加染色工作液進(jìn)入待標(biāo)記細(xì)胞，37℃孵育≤5min，然后再于4℃孵育15min?！镜蜏胤跤山档图?xì)胞對(duì)染料的內(nèi)吞作用，有助于染料對(duì)質(zhì)膜的標(biāo)記，并且降低染料定位細(xì)胞質(zhì)囊泡的可能性?！?/span>

3）染色結(jié)束后，用PBS清洗細(xì)胞，并用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

【注意】對(duì)于貼壁細(xì)胞，可直接在其貼壁狀態(tài)下進(jìn)行熒光標(biāo)記，相較于消化處理后的細(xì)胞呈現(xiàn)更高活力。

3. 細(xì)胞染色后處理

1）經(jīng)CM-DiI染色后的細(xì)胞置于3.7%（w/v）多聚甲醛（溶于PBS），于37℃固定10min；

2）室溫條件，用PBS清洗2次，每次5min；

3）于-20℃中，用丙酮透化處理10min；

4）室溫條件PBS清洗2次，每次5min；

5）之后根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)要求以及細(xì)胞類(lèi)型，進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如石蠟包埋-免疫組化分析，電鏡分析等。

資料顯示，a）經(jīng)CM-DiI染色后的PC12大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞兼容于2%（w/v）多聚甲醛固定和0.2%（w/v）Triton X-100的透化作用；b）經(jīng)綿陽(yáng)淋巴系統(tǒng)純化的CM-DiI標(biāo)記細(xì)胞，經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇、水化后仍能維持熒光；

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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