一氧化氮（NO）分析專用裂解液

Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay

產(chǎn)品簡介：

一氧化氮分析專用裂解液（Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay）是一款專門開發(fā)用于一氧化氮或總一氧化氮檢測用的細胞或組織裂解液。使用本品裂解所得的樣品，可用我公司的一氧化氮檢測試劑盒（貨號：NBS5939）或總一氧化氮檢測試劑盒（貨號：NBS5940）進行檢測。

本品不含蛋白酶和磷酸酶抑制劑，由于添加抑制劑可能會干擾后續(xù)的一氧化氮檢測。經(jīng)本品裂解細胞或組織所得的蛋白樣品，可使用增強型BCA蛋白濃度測定試劑盒測定總蛋白濃度。

保存條件: 

-20℃凍存，1年穩(wěn)定。

產(chǎn)品使用：

A， 培養(yǎng)的細胞樣品

1） 充分融解一氧化氮分析專用裂解液，之后混勻待用。

貼壁細胞：吸除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照六孔板的每孔細胞加入100-200μl裂解液的比例加量。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解15~30min，通常裂解液接觸細胞1-3秒后，細胞就會被裂解。

懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照六孔板的每孔細胞加入100-200μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必須分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。

【裂解液用量說明】：通常6孔板每孔細胞加入100μl裂解液已經(jīng)足夠，如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150μl或200μl。

2） 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的一氧化氮或蛋白濃度測定等實驗。樣品制備后如果當日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

B， 組織樣品

1） 充分融解一氧化氮分析專用裂解液，之后混勻待用。

2） 將組織剪切成細小的碎片，越小越好。取在液氮或超低溫冰箱冷凍30分鐘以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程控制在1-2min內(nèi)，以減少蛋白的降解。

3） 按照每20mg組織加入100-200μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以適當添加用量，如果需要高濃度的樣品，可適當降低用量。】

 4） 用玻璃勻漿器或組織勻漿器勻漿直至充分裂解。（如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋使樣品裂解充分，之后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解的足夠充分。）

5） 充分裂解后，10,000-14,000g離心3-5min，取上清，即可進行后續(xù)的一氧化氮或蛋白濃度測定等實驗。樣品制備后如果當日不能完成檢測，可以-20℃保存，但仍建議盡快完成檢測。

注意事項：

1.      裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進行。

2.      本品可耐受反復凍融。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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