Cell-Tracker Green CMFDA 活細(xì)胞示蹤探針（綠色）

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的Cell-Tracker細(xì)胞示蹤/細(xì)胞追蹤熒光探針專題。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Cell-Tracker熒光探針是用來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、定位、增殖、遷移、趨化和侵襲的優(yōu)秀工具。

Cell-Tracker Green CMFDA，英文全名：5-chloromethylfluorescein diacetate，能自由穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，在胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生成不具細(xì)胞膜滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物。該產(chǎn)物幾次傳代都能良好的保留在活細(xì)胞。在細(xì)胞群內(nèi)，染料只會(huì)轉(zhuǎn)移到子代細(xì)胞，不會(huì)轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。

Cell-Tracker Red CMTPX特地設(shè)計(jì)使其至少72h（典型有3~6代）能展示熒光，此染料表現(xiàn)出理想的示蹤特征：穩(wěn)定、工作濃度下無(wú)毒性、良好保留在細(xì)胞，且在生理pH下呈明亮熒光。另外，Cell-Tracker Red CMTPX的激發(fā)和發(fā)射光譜（492/517nm）與紅色熒光蛋白RFP很好的分開(kāi)，適用于多重標(biāo)記（見(jiàn)附表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征）。

產(chǎn)品特性：

1）  CAS NO.：136832-63-8

2）  同義名：CellTracker? Green CMFDA; Spiro(isobenzofuran-1(3H),9'-(9H)xanthen)-3-one, 3',6'-bis(acetyloxy)-5-(chloromethyl)-;

3）  分子式：C25H17ClO7

4）  分子量：464.86 g/mol

5）  外觀：無(wú)色固體

6）  溶解性：溶于DMSO

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品使用：

1．細(xì)胞準(zhǔn)備

在合適的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞。貼壁細(xì)胞可以在含蓋玻片的培養(yǎng)皿內(nèi)爬片生長(zhǎng)，裝入足量的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

2．操作步驟

以下描述的是將染料加到培養(yǎng)細(xì)胞以及在熒光顯微鏡下成像的步驟。各種因素，比如將染料加載到細(xì)胞或組織，可能都需根據(jù)特定的細(xì)胞類型對(duì)某些條件做出修改。

探針的最佳染色濃度需根據(jù)用途來(lái)調(diào)整。建議剛開(kāi)展實(shí)驗(yàn)需要測(cè)定至少1個(gè)10倍范圍內(nèi)的濃度。一般來(lái)說(shuō)，長(zhǎng)期染色（≥3天）或使用快速分裂的細(xì)胞需5-25μM的染料。對(duì)于短期實(shí)驗(yàn)（比如活力測(cè)定），使用低濃度染料（0.5-5μM）。為了維持正常的細(xì)胞形態(tài)和降低潛在的偽影，盡可能使用低濃度的染料。

2.1制備Cell-Tracker染色工作液

① 開(kāi)瓶前將產(chǎn)品從冰箱取出，放到室溫使其回溫至少20min。

② 用高質(zhì)量的無(wú)水DMSO溶解粉末使其濃度為10mM。例如，對(duì)1mgCell-Tracker Green CMFDA（MW:464.86g/mol）凍干粉，加入215μlDMSO充分溶解，即得到10mM母液。

③ 用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋母液到0.5-25μM的工作濃度。預(yù)熱染色工作液到37℃。

2.2懸浮細(xì)胞染色步驟

① 離心收集細(xì)胞，吸掉上清液。用預(yù)熱的Cell-Tracker染色工作液輕輕的重懸細(xì)胞。

② 在適合特定細(xì)胞類型的生長(zhǎng)條件下孵育15-45min。

③ 離心細(xì)胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入選擇的培養(yǎng)基，將標(biāo)記好的細(xì)胞分配到載玻片或到選擇的培養(yǎng)器皿內(nèi)。

⑤ 根據(jù)附表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的濾片來(lái)進(jìn)行成像檢測(cè)。

2.3貼壁細(xì)胞染色步驟

① 吸走培養(yǎng)基。

② 輕輕加入預(yù)熱的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在適合特定細(xì)胞類型的生長(zhǎng)條件下孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入選擇的培養(yǎng)基。

⑥ 根據(jù)表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的濾片來(lái)進(jìn)行成像檢測(cè)。

3．熒光顯微鏡觀察

Cell-Tracker熒光探針可用帶標(biāo)準(zhǔn)光學(xué)和圖像增強(qiáng)的各種落射熒光光學(xué)顯微鏡檢測(cè)。根據(jù)染料選擇合適的濾片。見(jiàn)附表1 Cell-Tracker熒光探針的光譜特征。

表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，保存和操作過(guò)程中注意避光。

2.      避免使用含氨基和巰基的緩沖液。

3.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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