活細胞示蹤三色組合試劑盒（綠色/紅色/深紅色）

Cell-Tracker Three-color Trial Kit (Green/Red/Deep red)

【溫馨提示】：見我司整理的Cell-Tracker細胞示蹤/細胞追蹤熒光探針專題。

產(chǎn)品簡介：

Cell-Tracker熒光探針是用來監(jiān)測細胞運動、定位、增殖、遷移、趨化和侵襲的優(yōu)秀工具。

Cell-Tracker熒光探針能自由穿透細胞膜進入細胞，在胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生成不具細胞膜滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物。Cell-Tracker熒光探針（除了Cell-Tracker Deep Red）含有一氯甲基或溴甲基基團，與巰基反應(yīng)，利用谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的催化作用。大多數(shù)細胞中谷胱甘肽含量很高（高達10mM），谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶普遍存在。

Cell-Tracker Deep Red含一琥珀酰亞胺酯反應(yīng)基團，與蛋白上的胺基反應(yīng)。一旦轉(zhuǎn)化為不可逆產(chǎn)物，這些產(chǎn)物幾次傳代都能良好的保留在活細胞中。在細胞群內(nèi)，染料只會轉(zhuǎn)移到子代細胞，不會轉(zhuǎn)移到鄰近細胞。

Cell-Tracker探針特地設(shè)計使其至少72h（典型有3~6代）能展示熒光，此染料表現(xiàn)出理想的示蹤特征：穩(wěn)定、工作濃度下無毒性、良好保留在細胞，且在生理pH下呈明亮熒光。

該試劑盒提供三種不同激發(fā)和發(fā)射波長的Cell-Tracker熒光探針，每種探針都以最小規(guī)格供貨，方便初次進行示蹤實驗的客戶，以最經(jīng)濟的方式優(yōu)化出所需的最佳探針和實驗條件。也特別適合同時做2-3種細胞示蹤且用量少的客戶。（見附表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征）。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少2年有效。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：

1．細胞準備

在合適的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)細胞。貼壁細胞可以在含蓋玻片的培養(yǎng)皿內(nèi)爬片生長，裝入足量的生長培養(yǎng)基。

2．操作步驟

以下描述的是將染料加到培養(yǎng)細胞以及在熒光顯微鏡下成像的步驟。各種因素，比如將染料加載到細胞或組織，可能都需根據(jù)特定的細胞類型對某些條件做出修改。

探針的最佳染色濃度需根據(jù)用途來調(diào)整。建議剛開展實驗需要測定至少1個10倍范圍內(nèi)的濃度。一般來說，長期染色（≥3天）或使用快速分裂的細胞需5-25μM的染料。對于短期實驗（比如活力測定），使用低濃度染料（0.5-5μM）。由于Cell-Tracker Deep Red染料的熒光信號高，最佳使用濃度在250nM-1μM。為了維持正常的細胞形態(tài)和降低潛在的偽影，盡可能使用低濃度的染料。

2.1制備Cell-Tracker染色工作液

① 開瓶前將產(chǎn)品從冰箱取出，放到室溫使其回溫至少20min。

② 用高質(zhì)量的無水DMSO溶解粉末使其濃度為1-10mM。
a）對于Cell-Tracker Green CMFDA（MW: 464.86 g/mol），每管50μg固體，加入10.7μl DMSO充分溶解，即得到10mM母液。若單次用不完，建議根據(jù)單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光保存。
b）對于Cell-Tracker Red CMTPX（MW: 686.25 g/mol），每管 50μg固體，加入7.2μl DMSO充分溶解，即得到10mM母液。若單次用不完，建議根據(jù)單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光保存。
c）對于Cell-Tracker Deep Red（MW: 698.3 g/mol），每管15μg固體，加入20μl DMSO充分溶解，即得到1mM母液。若單次用不完，建議根據(jù)單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光保存。

③ 用無血清培養(yǎng)基稀釋母液到0.5-25μM的工作濃度（最佳濃度需優(yōu)化）。預(yù)熱染色工作液到37℃。

2.2懸浮細胞染色步驟

① 離心收集細胞，吸掉上清液。用預(yù)熱的Cell-Tracker染色工作液輕輕的重懸細胞。

② 在適合特定細胞類型的生長條件下避光孵育15-45min。

③ 離心細胞，吸掉Cell-Tracker染色工作液。

④ 加入選擇的培養(yǎng)基，將標記好的細胞分配到載玻片或到選擇的培養(yǎng)器皿內(nèi)。

⑤ 根據(jù)附表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的濾片來進行成像檢測。

2.3貼壁細胞染色步驟

① 吸走培養(yǎng)基。

② 輕輕加入預(yù)熱的Cell-Tracker染色工作液。

③ 在適合特定細胞類型的生長條件下避光孵育15-45min。

④ 吸掉Cell-Tracker染色工作液。

⑤ 加入選擇的培養(yǎng)基。

⑥ 根據(jù)表1選擇合適激發(fā)和發(fā)射波長的濾片來進行成像檢測。

3．熒光顯微鏡觀察

Cell-Tracker熒光探針可用帶標準光學(xué)和圖像增強的各種落射熒光光學(xué)顯微鏡檢測。根據(jù)染料選擇合適的濾片。見附表1 Cell-Tracker熒光探針的光譜特征。

表1. Cell-Tracker熒光探針的光譜特征

注意事項：

1.      熒光染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光。

2.      避免使用含氨基和巰基的緩沖液。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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