Calcein Deep Red AM 鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝規(guī)格 | 價格 |
NBS2019-1mg | Calcein Deep Red AM 鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯 | 1mg | 4224 |
【溫馨提示】:見我司整理的Calcein 鈣黃綠素(常用的活細胞熒光探針)專題,尋找最合適波長的鈣黃綠素活細胞探針。
產(chǎn)品簡介:
Calcein, AM,中文名鈣黃綠素乙酰甲酯,CAS NO:148504-34-1,一種具細胞膜滲透性最受歡迎的活細胞熒光染料,用來標記和監(jiān)測活細胞功能,呈綠色熒光(Ex/Em= 490nm/515nm)。然而,Calcein, AM單一顏色使其不能將其用在多重標記實驗,比如,其無法和GFP轉(zhuǎn)染細胞聯(lián)合使用,因光譜一致。為了解決這一應(yīng)用缺陷,我司特別開發(fā)出Calcein Red(CAT NO.:NBS2016),Calcein Deep Red(CAT NO.:NBS2019)這些衍生物,能夠聯(lián)合GFP或FITC等熒光素實現(xiàn)對活細胞的多重標記和功能分析。
鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯(Calcein Deep Red AM)自身無熒光,具有細胞膜滲透性。能夠輕易進入活細胞,被細胞內(nèi)酯酶水解生成鈣黃綠素深紅(Calcein Deep Red),產(chǎn)生強烈的深紅色熒光(Ex/Em=643/663nm),用標準的Cy5濾片設(shè)置檢測。
產(chǎn)品特性:
1) 同義名:Calcein Deep Red AM;Calcein Deep Red AM Ester;鈣黃綠素乙酰氧基甲酯(深紅色),鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯;
2) 分子量:~600
3) 純度:≥95%(HPLC)
4) Ex/Em:643/663nm
5) 溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
保存條件:
-20℃干燥保存,避免強光直射,有效期一年。
應(yīng)用實例:
Fig 1.HeLa細胞(活細胞+固定細胞)經(jīng)Calcein Deep Red AM(CAT NO.:NBS2019)染色的圖片。
產(chǎn)品使用:
1、儲存液制備
儲存液配制范圍可為2~5 mM,具體根據(jù)工作濃度來決定,建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工作液為5μM,那么可配制5mM的儲存液,即往1mg Calcein Deep RedAM(Mw ~600)內(nèi)加入333μl細胞培養(yǎng)級別的DMSO即可。儲存液需要根據(jù)單次用量分裝,-20℃避光干燥保存,一定要避免受潮,此種情況下可穩(wěn)定保存數(shù)月。
2、染色工作液制備
于正式實驗前,或溶解Calcein Deep RedAM粉末配制儲存液,或取一管已配制好的Calcein Deep RedAM儲存液并回至室溫使充分融化。用添加有2.5mM 丙磺舒(CAT NO. NBS2007)的HHBS(Hanks with 20mM Hepes buffer)或其他適當?shù)木彌_液(pH 7.0)稀釋儲存液到5~10 μM工作濃度。
【注1:Calcein Deep Red染色工作液很不穩(wěn)定,需要使用前配制。】
【注2:許多細胞都含有機陰離子轉(zhuǎn)運體。因此高度推薦染色工作液內(nèi)添加2.5mM丙磺舒(有機陰離子轉(zhuǎn)運體抑制劑),以防止熒光探針泄露到細胞外?!?/span>
3、染色步驟
以下是基于96孔板的Calcein Deep Red活細胞染色步驟,僅作參考。具體實驗請根據(jù)自身要求做調(diào)整。
a. 細胞準備:于黑框/透明底的96孔微孔板內(nèi)按照100~10,000個細胞/孔的量鋪板。設(shè)置空白孔(不含細胞的培養(yǎng)基)。【注意】:每種細胞系需要根據(jù)實際情況來確認細胞增殖或細胞毒性誘導的最佳細胞密度。增殖分析,細胞密度相對少些;毒性分析,起始細胞密度高些。建議96孔板的單孔體積為100 μL。
b. 藥物處理:加待測藥物到細胞內(nèi)處理適當時間(比如24h,48h或96h)。設(shè)置空白孔(不含細胞的培養(yǎng)基),加入相應(yīng)量的待測藥物?!咀⒁狻浚核幬锾砑忧翱刹挥们逑醇毎H欢?,若是藥物是血清敏感性,那在添加藥物前需要吸掉生長培養(yǎng)基和血清因子。替換之細胞用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)。
c. 吸掉培養(yǎng)基?!咀⒁狻浚禾结樇虞d前必須去除培養(yǎng)基。
d. 按照100 μL/孔(96孔板)的量加入Calcein Deep Red染色工作液。
e. 室溫或37℃避光孵育1h。
【注意1】:適當?shù)姆跤龝r間取決于細胞類型和使用的細胞濃度。每個實驗建議進行孵育時間優(yōu)化。
【注意2】:對于懸浮細胞,探針孵育結(jié)束后,于800rpm離心2min。
f. 用含合適濾光片(Ex/Em= 643nm/663nm)的儀器進行熒光檢測?!咀⒁猓喝绻麩晒獗尘案?,可在熒光信號檢測前用含2.5mM丙磺舒的HHBS緩沖液替換Calcein Deep Red染色工作液?!?/span>
注意事項:
1. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
2. 乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。
3. Calcein Red AM對濕度非常敏感,粉末保存一定要保持干燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光凍存,且必須緊緊密封蓋子,干燥保存。Calcein Red AM工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品訂購:
產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
50ug | ||
100T | ||
1mg | ||
200mg | ||
1mg | ||
1mg | ||
25mg | ||
1g | ||
2x77g |