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(NBS3202) JC-1 (5mgml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

欄目:NoninBio
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(NBS3202)JC-1 (5mgml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針
貨號:NBS3202-200ul
品牌:NoninBio

 

JC-1 (5mg/ml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

 

產品編號

產品名稱

包裝規(guī)格

價格

NBS3202-200ul

JC-1 (5mg/ml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

200μl (1mg)

750

 

產品簡介:

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內,可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內,JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物,聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光(Ex=585 nm, Em=590 nm);不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失,JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中,產生綠色熒光(Ex=514 nm, Em=529 nm)。

JC-1不僅可用于定性檢測,因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測,因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。觀察時,只需使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。

本品為溶于DMSOJC-1儲存液,濃度5 mg/mlCAS NO.3520-43-2 ,只需用合適的緩沖液稀釋到工作濃度即可使用。JC-1用于檢測細胞的線粒體膜電位時常用的濃度范圍為120 μg/ml,對于很多細胞適宜采用的工作濃度為10 μg/ml   

 

產品特性:

1)化學名:5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

2CAS NO3520-43-2 

3)分子式:C25H27Cl4IN4

4)分子量:652.23 g/mol

5 純度:>95%HPLC

6 Ex/Em:單體形式(monomer form):Ex=514 nm, Em=529 nm;

          聚合物形式(J-aggregate form):Ex=585 nm, Em=590 nm;

 

保存條件

-20℃干燥避光保存。第一次使用建議將儲存液分裝,避免反復凍融,一年有效。

產品使用:

1. 染色工作液制備

將凍存的儲存液置于室溫充分融化,之后用緩沖液或者預熱的培養(yǎng)基直接稀釋儲存液(5 mg/ml)到需要的工作濃度,邊震蕩邊稀釋,充分混勻。為了去除任何不溶顆粒,建議13,000 x g離心JC-1工作液1 min,小心吸取上清轉移到新的管子內。整個過程要避光操作?!咀⒁狻浚阂?span>JC-1不溶于水,很可能在稀釋到工作液的過程中形成聚集顆粒,建議細胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒后再使用。

 

2. JC-1染色步驟(流式細胞儀)

1)于6-,1224-孔板上進行細胞鋪板,調整密度為5×105cells/ml。37℃,5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進行凋亡誘導?!咀⒁狻浚?/strong>進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106cells/ml,也可根據(jù)自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。

2)取0.5 ml細胞懸液至無菌的離心管內;

3)室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清。

4)用0.5 ml JC-1工作液重懸細胞,于37℃5% CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min;

【注意】:一般情況,15 min足以進行充分的染色。

5)室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;

6)用2 ml細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞,之后室溫條件400 x g離心5 min;吸掉上清;

7)重復步驟6);

8)用0.5 ml新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞,即可進行后續(xù)的流式分析?!咀⒁狻浚赫堮R上進行流式定量分析,此細節(jié)很重要。

數(shù)據(jù)分析:含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測;含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1FITC)通道檢測。

 

3. JC-1染色步驟(熒光顯微鏡)

A. 懸浮細胞

1-6)同上JC-1染色步驟(流式細胞儀);

7)用0.3 ml緩沖液重懸細胞,即可進行熒光顯微鏡檢測?!咀⒁狻浚赫堮R上進行熒光顯微分析,此細節(jié)重要。

數(shù)據(jù)分析:使用可同時檢測FITC/TRITC或者FITC/Texas RedTM的雙帶帶通濾波器進行檢測。健康細胞因JC-1聚集后線粒體呈紅色,最大發(fā)射波長為590 nm。而凋亡/壞死細胞內的JC-1以單體形式存在,線粒體呈綠色,最大發(fā)射波長為530 nm

 

B.  貼壁細胞

1)培養(yǎng)皿內用蓋玻片進行細胞爬片或者細胞培養(yǎng)在腔室玻片(chamber slide)上。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進行凋亡誘導。

2)染色前開始配制JC-1工作液,配制步驟見上。

3)吸掉細胞培養(yǎng)液,然后加入足夠覆蓋所有細胞的JC-1工作液。于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min;【注意】:一般情況,15 min足以進行充分的染色。

4)吸掉培養(yǎng)液,然后用合適的緩沖液清洗細胞2次。

5)加入2ml細胞培養(yǎng)液(培養(yǎng)液可含血清和酚紅)或者PBS緩沖液,于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下觀察。數(shù)據(jù)分析同A.懸浮細胞。

 

4. JC-1染色步驟(熒光酶標儀)

1-7)同上JC-1染色步驟(流式細胞儀);

8)用0.3 ml緩沖液重懸細胞;然后按照每孔0.1 ml的量將染色好的細胞轉移到黑色的96孔板內,即可進行熒光酶標板分析?!咀⒁狻浚赫堮R上進行熒光顯微分析,此細節(jié)重要。

數(shù)據(jù)分析:健康細胞,JC-1單體聚集形成聚合物,線粒體呈現(xiàn)強烈的紅色熒光(激發(fā)波長550 nm,發(fā)射波長600 nm)。而凋亡或壞死細胞內JC-1以單體形式存在,線粒體呈強烈的綠色熒光(激發(fā)波長485 nm,發(fā)射波長535nm)。之后計算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值,用來判斷細胞健康程度。

 

注意事項:

1.      JC-1是光敏感性的,所有染色步驟的操作過程中避免強光接觸。

2.      JC-1染色完成后,立即進行后續(xù)的結果分析非常必要。

3.      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

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產品編號

產品名稱

包裝規(guī)格

NBS3202-200ul

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