JC-10 (2mg/ml in DMSO) 線粒體膜電位熒光探針

產(chǎn)品簡介：

JC-10是一種新型的用來監(jiān)測線粒體膜電位變化的熒光探針，是JC-1的優(yōu)越替代物。與JC-1相比，具有以下幾個(gè)重要優(yōu)勢：1）溶解性得以改良——在水溶液中形成沉淀可能性明顯降低；2）使用更方便——簡化步驟將手動操作時(shí)間最小化；3）熒光信號更高——改良的信號與背景熒光的信噪比；4）結(jié)果更穩(wěn)定——優(yōu)化探針以保證更連續(xù)性和穩(wěn)定性結(jié)果。

JC-10是一種替換JC-1，用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。JC-10以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi)，可以用來檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi)，JC-10聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-10只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來衡量。觀察時(shí)，只需使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

JC-10可用來檢測大量細(xì)胞類型如神經(jīng)元和心肌細(xì)胞的線粒體膜電位，也可用來研究重要的細(xì)胞生理活動，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡發(fā)生等。

本品為溶于DMSO的JC-10儲存液，濃度2 mg/ml，只需用合適的緩沖液稀釋到工作濃度即可使用。

產(chǎn)品特性

1） 化學(xué)名：5,6 -Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide; Enhanced JC-1;

2） 分子式：C25H27Cl2IN4

3） 分子量：583.34 g/mol

4）  純度：＞95%（HPLC）

5）  Ex/Em：單體形式（monomer form）：Ex=490 nm, Em=525 nm；

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=540 nm, Em=590 nm；

保存條件: 

-20℃避光保存。第一次使用，建議將儲存液分裝成單次用量，避免反復(fù)凍融，一年有效。

產(chǎn)品使用：

1. 染色工作液制備

本品以JC-10（2mg/ml in DMSO，約3mM）儲存液形式提供，第一次使用請按照單次用量分裝，避光凍存，避免反復(fù)凍融。

JC-10（1×）工作液制備：實(shí)驗(yàn)前取一管JC-10儲存液置于室溫，使其充分融化，之后用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他緩沖液（pH 7-8，含0.02% Pluronic?F-127）配制成10-30μM的1×工作液，漩渦混勻待用。

【注意】：對于某些細(xì)胞系pH8的工作液可能防止JC-10泄露。

2. JC-10染色步驟（熒光酶標(biāo)儀）

1） 用待測藥物處理細(xì)胞一段時(shí)間（比如，Jurkat細(xì)胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導(dǎo)凋亡。對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基）加入相應(yīng)體積的藥物緩沖液。

2）按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入JC-10工作液到培養(yǎng)孔內(nèi)。

3）將整個(gè)培養(yǎng)板置于37℃，5% CO₂孵育15-60min。

【注意】：合適的孵育時(shí)間取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。每次試驗(yàn)建議優(yōu)化孵育時(shí)間。

4）用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測Ex/Em = 500/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的熒光變化，計(jì)算兩者熒光信號比值，以判斷細(xì)胞健康程度。

【可選】：吸掉JC-10染色工作液，按照100μl/孔/96孔板或25μl/孔/384孔板的量加入HHBS緩沖液或其他生理緩沖液，然后再進(jìn)行熒光信號分析。

3. JC-10染色步驟（熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀）

1）用待測藥物處理細(xì)胞一段時(shí)間（比如，Jurkat細(xì)胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導(dǎo)凋亡。對于空白孔（不含細(xì)胞的培養(yǎng)基）加入相應(yīng)體積的藥物緩沖液。

2）離心去上清，調(diào)整細(xì)胞密度為1-5×10⁵細(xì)胞/管。

3）用500μl JC-10染色工作液重懸細(xì)胞。

4）室溫孵育或37℃，5%CO₂孵育10-30 min，避光。

【注意】：合適的孵育時(shí)間取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。每次試驗(yàn)建議優(yōu)化孵育時(shí)間。

5）用熒光顯微鏡分別觀察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/595 nm（TRITC通道）的熒光變化；或者用流式細(xì)胞儀（FL1和FL2通道進(jìn)行檢測）。

【可選】：離心后吸掉JC-10染色工作液，加入500μl HHBS緩沖液或其他合適緩沖液重懸細(xì)胞使其密度為1-5×10⁵細(xì)胞/管，然后再進(jìn)行熒光分析。

注意事項(xiàng)：

1.      JC-10是光敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強(qiáng)光接觸。

2.      JC-10染色完成后，立即進(jìn)行后續(xù)的結(jié)果分析非常必要；

3.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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