Fura Red, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針

【務(wù)必注意】：初次使用離子探針的用戶，強(qiáng)烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。 

產(chǎn)品簡介：

Fura Red是一種可見光激發(fā)的Fura-2類似物，提供獨(dú)特的可能性使其與單波長激發(fā)、綠色熒光的鈣離子探針（比如：Fluo-8）聯(lián)合使用時(shí)，通過顯微光度術(shù)、成像或流式細(xì)胞術(shù)來比率法測(cè)定單細(xì)胞內(nèi)的Ca²⁺水平。Fura Red, AM是Fura Red的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡單培養(yǎng)，即可輕易進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fura Red，從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。Fura Red, AM能夠與Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等同時(shí)加載進(jìn)入細(xì)胞。兩種鈣離子探針結(jié)合使用的優(yōu)勢(shì)在于能用更長的激發(fā)波長。這比傳統(tǒng)的紫外或近紫外激發(fā)的比率型探針對(duì)細(xì)胞造成更小的傷害，由于可見光波長對(duì)細(xì)胞的光毒性更小。Fura Red顯著的斯托克斯位移使其能與熒光素或熒光素樣的染料（使用單一激發(fā)波長）進(jìn)行多色熒光檢測(cè)。比如，研究者想同時(shí)測(cè)定單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的鈣流和氧化爆發(fā)，通過同時(shí)分析Fura Red和羅丹名123（二氫羅丹名123的氧化產(chǎn)物）的熒光值來滿足目的。Fura Red也能與轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)的藍(lán)色熒光蛋白結(jié)合使用。

產(chǎn)品特性：

1）CAS NO：149732-62-7

2）化學(xué)名：Glycine, N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[5-[2-[2-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl] amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-2-[(5-oxo-2-thioxo-4-imidazolidinylidene)methyl]-6-benzofuranyl]-, (acetyloxy)methyl ester

3）同義名：Fura Red, Acetoxymethyl Ester;

4）分子式：C₄₇H₅₂N₄O₂₄S

5）分子量：1088.99

6）純度：≥95% (HPLC)

7）最大激發(fā)/發(fā)射波長：471/652 nm（Ca²⁺-free），436/630 nm（Ca²⁺-bound）

8）溶解性：溶于DMSO（5mM）

9）化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃干燥避光保存，有效期至少1年。 

產(chǎn)品使用：

A， 試劑準(zhǔn)備

1） 配制Pluronic F-127母液： 稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨號(hào)：NBS2009-1g）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結(jié)晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。

2） HHBS Buffer (1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理緩沖液

B，操作步驟

1） 用無水DMSO溶解Fura Red, AM配制成2-5mM的儲(chǔ)存液，或?qū)⒁雅浜玫?span>Fura Red, AM儲(chǔ)存液取出于室溫回溫。（如：若配制成4mM的母液，需向50μg Fura Red, AM中加入11.5μl 無水DMSO）。準(zhǔn)備Fura Red, AM工作液之前，有時(shí)需要往Fura Red, AM儲(chǔ)存液中加入適量的20% Pluronic F-127溶液，以增強(qiáng)AM探針的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理緩沖液將 Fura Red, AM+DMSO儲(chǔ)存液稀釋到1-20μM的工作液。

3）【可選】如果細(xì)胞內(nèi)（比如CHO細(xì)胞）含有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體，丙磺舒（Probenecid，1-2.5mM）或磺吡酮（Sulfinpyrazone， 0.1-0.25mM）可能需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，以降低去酯化探針的泄露水平。

4） 將準(zhǔn)備好的Fura Red, AM染色工作液加入細(xì)胞，加入量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。室溫或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑如1mM 丙磺舒的緩沖液）清洗細(xì)胞1~2次，以去除殘留探針。

6） 37℃再孵育30min以保證細(xì)胞內(nèi)AM的完全去酯化。

7） 用合適的激發(fā)/發(fā)射波長來檢測(cè)熒光。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請(qǐng)?jiān)诟稍锏沫h(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請(qǐng)將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3.      Fura Red, AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Fura Red, AM第一次使用，建議儲(chǔ)存液現(xiàn)配現(xiàn)用，分裝成單次用量，嚴(yán)格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實(shí)驗(yàn)效果，盡量在短時(shí)間內(nèi)使用。

5.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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