Quin-2 AM, Cell Permeant鈣離子熒光探針

 【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養(yǎng)級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性和胞內(nèi)加載性。 

產(chǎn)品簡介：

鈣離子測定在各種生理活動中發(fā)揮著重要作用，與鈣離子結(jié)合從而表現(xiàn)出光譜反應的熒光探針使得研究人員能夠觀察胞內(nèi)游離鈣離子水平變化，通過熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光光度計和熒光酶標板來檢測。

Quin-2是第一代膜非滲透性的高親和鈣離子熒光探針（Kd=115nM, Ca²⁺），對鈣離子的選擇性高，不會受到鈉離子梯度、膜電位或胞內(nèi)pH干擾。像Quin-2的高親和探針適合用于監(jiān)測低水平鈣離子，比如：靜息細胞。細胞內(nèi)加載高達2mM的Quin-2未發(fā)現(xiàn)嚴重的探針毒性效應，因此，Quin-2可能適用于緩沖胞內(nèi)鈣瞬態(tài)。Quin-2與鈣離子結(jié)合后，紫外吸收和熒光光譜發(fā)生明顯遷移，熒光產(chǎn)率提高約20倍。Quin-2模擬鈣螯合劑EGTA的結(jié)構(gòu)而設(shè)計，與鎂離子相比，能更緊密的結(jié)合鈣離子。Quin-2不具膜滲透性，可通過顯微注射、電轉(zhuǎn)或劃痕負載的方式進入胞內(nèi)。與Fura-2、Indo-1、Fluo-3和Fluo-4相比，Quin-2具更低的吸收和光量子產(chǎn)率，因此，需要更高的加載濃度。最大波長（Ca²⁺-bound）：激發(fā)：339nm；發(fā)射：492nm。

Quin-2 AM（Quin-2 acetoxymethyl ester）是乙酰氧基甲酯形式的Quin-2，具細胞膜滲透性，能主動擴散進入胞內(nèi)。一旦進入細胞，被胞內(nèi)酯酶水解生成Quin-2，保留在胞內(nèi)。

產(chǎn)品特性：

1）化學名：N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[2-[[8-[bis[2-[(acetyloxy)

methoxy]-2-oxoethyl]amino]-6- methoxy-2-quinolinyl]methoxy]-4-methylphenyl]

-glycine(acetyloxy)methyl ester

2）同義名：Quin-2 Acetoxymethyl ester

3）CAS NO.: 83104-85-2

4）分子式：C38H43N3O18

5）分子量：829.8

6）外觀：固體

7）純度：≥90%

8）溶解性：DMSO

9）Ex/Em（Ca²⁺-bound）：339/492nm

保存條件: 

20℃干燥避光保存，有效期至少1年。

產(chǎn)品使用：

1）用無水DMSO溶解Quin-2 AM配制成10mM或其它適宜濃度的儲存液，或?qū)⒁雅浜玫?span>Quin-2 AM儲存液取出于室溫回溫。（如：若配制成10mM的母液，需向1mg Quin-2 AM中加入120.5μl無水DMSO充分溶解，混勻即可）。

2）用HHBS或其他生理緩沖液將Quin-2 AM+DMSO儲存液稀釋到含0.04% Pluronic F-127的10-20μM染色工作液。

【注①】：添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Quin-2 AM+DMSO儲存液，使Pluronic F-127的濃度約為0.04%。Pluronic F-127可以防止AM探針在溶液中聚合并促使探針更好進入細胞。但Pluronic F-127可降低AM探針的穩(wěn)定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議加入儲存液長期保存。

【注②】：Quin-2 AM的適宜使用濃度需根據(jù)實驗要求進行優(yōu)化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結(jié)果的基礎(chǔ)上盡量使用最低探針濃度。

【注③】：Quin-2 AM工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復凍存。

3）【可選】如果細胞內(nèi)（比如CHO細胞）含有機陰離子轉(zhuǎn)運體，丙磺舒（Probenecid，1-2mM）可能需要加入上述染色工作液內(nèi)（在孔內(nèi)的最終濃度為0.5-1mM），以降低去酯化探針的泄露水平。

【注①】：我司提供多種丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（NBS2008-154mg），能降低有機溶劑的使用。

4） 加入等體積的染色工作液到細胞培養(yǎng)孔內(nèi)，37℃孵育30-60min。

【注①】：某些細胞系探針的加載時間長于1h能提供更好的信號。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理緩沖液（如有必要，使用含轉(zhuǎn)運體抑制劑如1mM丙磺舒的緩沖液）清洗細胞1~2次，以去除殘留探針。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出后請在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3.      Quin-2 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可在20-25℃溫育片刻至全部融解后使用。

4.      Quin-2 AM第一次使用，建議儲存液現(xiàn)配現(xiàn)用，分裝成單次用量，嚴格做到≤-20℃密封干燥凍存，以防止受潮。為了保證良好的實驗效果，盡量在短時間內(nèi)使用。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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