鬼筆環(huán)肽及偶聯(lián)物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）

產(chǎn)品專(zhuān)題
 ◎ FORSTAINING ACTIN肌動(dòng)蛋白染色探針 ◎    

背景介紹：

肌動(dòng)蛋白（Actin）是一種分子量~42kDa的細(xì)胞骨架蛋白，幾乎存在所有真核細(xì)胞中。也是一種最高度保守蛋白，藻類(lèi)和植物之間序列差異不超過(guò)20%。肌動(dòng)蛋白是細(xì)胞中兩種纖維的單體亞基：微絲（Microfilaments），又稱(chēng)肌動(dòng)蛋白絲（Actin filaments），細(xì)胞骨架三種主要成分之一；細(xì)肌絲（Thin filaments），肌肉細(xì)胞收縮絲的一部分。因此，肌動(dòng)蛋白參與許多重要的細(xì)胞生理過(guò)程，包括肌肉收縮、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分化和胞質(zhì)分裂、囊泡和細(xì)胞器運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞信號(hào)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的搭建和維持。

單體形式存在的稱(chēng)為球形肌動(dòng)蛋白（Globular actin，G-actin），具有緊密的結(jié)合位點(diǎn)介導(dǎo)其與另外兩個(gè)單體肌動(dòng)蛋白進(jìn)行頭-尾相互作用，從而使得單體激動(dòng)蛋白聚合形成纖維（Filamentous actin，F-actin）【見(jiàn)圖1.肌動(dòng)蛋白絲的組裝和結(jié)構(gòu)】。

圖1. 肌動(dòng)蛋白絲的組裝和結(jié)構(gòu)。（A）G-actin聚合形成F-actin。第一步生成二聚體和三聚體，然后通過(guò)逐步添加單體蛋白到兩端來(lái)生長(zhǎng)。（B）G-actin的結(jié)構(gòu)。

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱(chēng)鬼筆鵝膏素，是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七肽毒素，以極高的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白），不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）。不像一些肌動(dòng)蛋白抗體，同時(shí)識(shí)別單體和聚合形式的肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽使得肌動(dòng)蛋白聚合/解離的臨界濃度降低至1μg/ml，可用作一種聚合增強(qiáng)劑。產(chǎn)生的復(fù)合物高度穩(wěn)定（解離常數(shù)約為3×10–8M），從而抵抗去聚合和去組裝活性。

本公司（上海諾寧生物）提供一系列常用的科研用途鬼筆環(huán)肽及其熒光偶聯(lián)物，顏色涵蓋全部的可見(jiàn)光光譜區(qū)間。如此豐富的鬼筆環(huán)肽偶聯(lián)物滿足用戶多重需求，且基本現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。

產(chǎn)品應(yīng)用：

1） 用來(lái)標(biāo)記、鑒定和定量肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）；

2） 體外穩(wěn)定肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）；

3） 體外觀察固定或活細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）的定位、分布，以及觀測(cè)單一的F-actin；

4） 高分辨率下研究肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)；

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1） 應(yīng)用范圍廣：甲醛固定和透化處理的組織切片、培養(yǎng)細(xì)胞，以及無(wú)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)體系；無(wú)物種差異性；

2） 親和力高、穩(wěn)定性強(qiáng)：解離常數(shù)Kd約3×10–8M；

3） 特異性強(qiáng)：特異結(jié)合F-actin，不會(huì)結(jié)合G-actin，背景明顯低于Actin抗體染色，幾乎無(wú)特異性染色，且不受物種限制。

4） 毒性?。汗砉P環(huán)肽及衍生物分子量小，對(duì)F-actin影響小。經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多未標(biāo)記actin的功能特征包括與肌球蛋白的相互作用。

5） 靈敏度高：nM濃度即可達(dá)到染色需求；

6） 適合多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：提供多種鬼筆環(huán)肽熒光偶聯(lián)物，選擇范圍廣，能實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記；

染色流程【圖2】：

染色示例：

 圖3. Jasplakinolide (Jas)或Cytochalasin D (Cyto D)對(duì)HSC-T6細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架重組的生理效應(yīng)。HSC-T6細(xì)胞分別經(jīng)DMSO (vehicle control)，Jas (100 nM) or Cyto D (1 μM)處理1h，之后4%多聚甲醛固定15 min。之后phalloidin-FITC（CAT# NBS5830）染色肌動(dòng)蛋白絲，細(xì)胞核用DAPI（CAT# NBS1205）復(fù)染。熒光顯微鏡下成像檢測(cè)。

圖4. HeLa細(xì)胞經(jīng)iFluor? 488 Phalloidin染色后熒光顯微鏡檢測(cè)圖（FITC濾片設(shè)置-綠色）。

 圖5. HeLa細(xì)胞經(jīng)iFluor? 647 Phalloidin染色后熒光顯微鏡檢測(cè)圖（Cy5濾片設(shè)置-紅色）。

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【注】：iFluor?系列的熒光光譜同Alexa Fluor?系列，熒光穩(wěn)定性和熒光強(qiáng)度幾乎與Alexa Fluor?一致，是傳統(tǒng)熒光探針FITC, TRITC, 5-TAMRA等的升級(jí)品。

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