DiI (DiIC18(3)) 細胞膜橙紅色熒光探針

產(chǎn)品描述

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長鏈的親脂性二烷基碳菁類染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標記細胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強度很弱）結(jié)合時，其熒光強度顯著增強。一旦進入細胞后，它們在細胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴散，于最佳濃度條件下可將整個細胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標準FITC和TRITC濾光器檢測，可結(jié)合使用。其中，DiI及其衍生物由于極其低的細胞毒性，應(yīng)用最為廣泛。不僅普遍用于活體和固定組織及細胞的神經(jīng)元逆行性和順行性示蹤分析，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程的細胞遷移，通過FRAP（熒光光漂白恢復技術(shù)）檢測脂質(zhì)在細胞膜上的擴散過程，檢測細胞毒性，以及標記脂蛋白如LDL和HDL等。

DiI (DiIC18(3)) 是一種親脂性膜染料，通常用作神經(jīng)元和其它細胞的長期示蹤劑。DiI 在進入細胞膜之前熒光非常弱，僅當進入到細胞膜后才可以被激發(fā)出很強的橙紅色熒光 (λex=549 nm，λem=565 nm)。

DiI基本特性：

1)      別名：DiI perchlorate; DiIC18(3)

2)      CAS NO：41085-99-8

3)      分子式：C59H97ClN2O4

4)      分子量：933.87 g/mol

5)      純度：≥99%（TLC）

6)      溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

7)      外觀：紅色至暗紅色，紫色至深紫色粉末

8)      Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）

9)      推薦濾光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10)   化學結(jié)構(gòu)圖：

保存與運輸方法

-2-8oC干燥避光保存，有效期一年。

溶液配制表

DMSO

使用方法

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實驗條件做出調(diào)整。

1.染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻?未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調(diào)整到1～5μM的工作濃度?！咀⒁狻抗ぷ饕鹤罱K濃度需要根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進行最優(yōu)濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4、顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5、流式細胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分別用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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