DiR Iodide (DiIC18(7)) 細(xì)胞膜深紅色熒光探針

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類(lèi)長(zhǎng)鏈的親脂性二烷基碳菁類(lèi)染料（Dialkylcarbocyanines）熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)。作為一類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，于最佳濃度條件下可將整個(gè)細(xì)胞均勻染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測(cè)，可結(jié)合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，特別適合用于標(biāo)記具本底熒光的細(xì)胞和組織。而，DiR在體內(nèi)活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

本品以DiR的碘鹽形式提供，英文名：1,1-dioctadecyl-3,3,3,3

-tetramethylindotricarbocyaine iodide，純度≥95%，適用于熒光檢測(cè)研究。

基本特性：

1） 同義名：DiR Iodide; DiIC18(7);1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyaine iodide;

2） 推薦濾光器：Omega-XF112, Chroma-41009

3） 分子式：C63H101IN2

4） 分子量：1013.39g/mol

5） 外觀：藍(lán)色至深藍(lán)色固體

6） 純度：≥95%（HPLC） 

7） Ex/Em：750/780 nm（甲醇）

8） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，有效期二年。

產(chǎn)品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)條件做出調(diào)整。

1. 染色液制備

1）儲(chǔ)存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲(chǔ)存液。例如，取25mg DiR（Mw：1013.39g/mol）溶于4.93ml無(wú)水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲(chǔ)存液。

【注意】未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)存液，調(diào)整到1～5 μM的工作濃度。

【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度開(kāi)始，以10倍范圍為區(qū)間進(jìn)行最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

5）再重復(fù)3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細(xì)胞染色

1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過(guò)量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內(nèi)。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

4）37℃孵育細(xì)胞2～20min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標(biāo)記結(jié)果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測(cè)

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見(jiàn)下表：

2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005；

5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞分別用流式細(xì)胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通道檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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