DiA (4-Di-16-ASP) 細胞膜熒光探針

【溫馨提示】：見我司整理的細胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產品專題 。

產品簡介：

DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），擴散進入細胞膜（比DiO擴散速度快），常用于神經元的示蹤。最顯著的特點就是能與DiI（DiIC18(3)）聯(lián)合使用進行雙色標記。DiA能用于甲醛固定組織染色，研究發(fā)現(xiàn)某些情況下當DiO不能標記固定組織時，DiA可得到良好標記。DiA水溶液中的熒光非常弱，但與磷脂雙層膜結合后，光譜遷移熒光明顯加強。因其發(fā)射光譜非常廣，可被綠色，橙色，甚至是紅色濾片檢測到。

本品以DiA的碘鹽形式提供，英文名：4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide，純度≥90%，適用于熒光檢測研究。

基本特性：

1） 同義名：4-Di-16-ASP;4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;

2） 分子式：C46H79IN2

3） 分子量：787.04g/mol

4） 外觀：紅色或橙色固體

5） 純度：≥90%

6） Ex/Em：491/613nm（甲醇）

7） 溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇

8） 推薦濾光器：Omega-XF21, Chroma-31024

9）化學結構圖：

保存條件: 

-20oC避光干燥保存，有效期一年。

產品使用：

【注意】以下使用方法僅用作參考，可根據(jù)具體的實驗條件做出調整。

1. 染色液制備

1）儲存液制備：用DMSO或乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04g/mol）溶于6.35ml無水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的儲存液?！咀⒁狻课词褂玫膬Υ嬉悍盅b儲存在-20℃，避免反復凍融，且要避光保存。

2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到1～5 μM的工作濃度。【注意】工作液最終濃度需要根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度開始，以10倍范圍為區(qū)間進行最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細胞染色

1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上清液，之后輕柔加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

5）再重復3），4）步驟兩次。

3. 貼壁細胞染色

1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，濾掉過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的小室內。

3）在蓋玻片的一角加入100μL的染色工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同?？梢?span>20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化以保證得到均一化的標記結果。

5）吸掉染色工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然后吸走培養(yǎng)基。 

4、顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

*：濾光片編號是熒光顯微鏡檢測的建議寬帶濾片設置。

*：DiR的熒光發(fā)射肉眼不可見，必須通過CCD攝像頭或其他近紅外敏感檢測器檢測。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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