Di-2-ANEPEQ (JPW 1114) 膜電位熒光探針

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事開(kāi)發(fā)，是最靈敏且穩(wěn)定的快速響應(yīng)探針，能檢測(cè)亞毫秒級(jí)的膜電位變化。Di-4-ANEPPS（貨號(hào)：NBS3227）和Di-8-ANEPPS（貨號(hào)：NBS3228）在各種組織、細(xì)胞和模型膜系統(tǒng)中表現(xiàn)出相當(dāng)一致的熒光強(qiáng)度變化率（10%熒光變化/100mV）。ANEP染料的電子結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而，它們的熒光光譜對(duì)周?chē)碾妶?chǎng)變化做出響應(yīng)。這些光學(xué)響應(yīng)足夠快來(lái)檢測(cè)興奮細(xì)胞（包括單個(gè)神經(jīng)元、心肌細(xì)胞和完整組織制備物）的瞬時(shí)電位變化。另外，ANEP染料的激發(fā)光譜呈現(xiàn)出電位依賴(lài)的遷移，從而使其能通過(guò)測(cè)定激發(fā)波長(zhǎng)下的熒光比來(lái)定量膜電位。ANEP染料結(jié)構(gòu)上的差異使其適用于各種特定應(yīng)用。

電位敏感ANEP染料的特征：

① 兩性離子分子，在不同細(xì)胞和組織樣本中表現(xiàn)出最穩(wěn)定的電位響應(yīng)。

② 結(jié)合到磷脂膜上的最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)約為465/635nm【但光譜特征與環(huán)境密切關(guān)聯(lián)】

③ 非熒光直至結(jié)合到膜上

④ 溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（貨號(hào)：NBS3229）是水溶性的ANEP染料】

⑤ 快速響應(yīng)探針，適用于檢測(cè)亞毫秒的膜電位變化

Di-2-ANEPEQ，又稱(chēng)為JPW 1114，一種快速響應(yīng)的膜電位探針。具高水溶性，通常以微注射的方式導(dǎo)入細(xì)胞。也能局部用于大腦組織。

基本特性：

1） CAS NO.：160605-94-7

2） 同義名：JPW 1114

3） 分子式：C26H35Br2N3 

4） 分子量：549.38g/mol

5） 外觀(guān)：橙色至暗紅色固體

6） 純度：≥95%（HPLC）

7） 熒光：λex 530 nm, λem 720 nm in ethanol【需注意：相較于在有機(jī)溶劑內(nèi)，苯乙烯染料與脂質(zhì)結(jié)合后通常發(fā)生很大的藍(lán)光遷移】

8） 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF

保存條件: 

熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

產(chǎn)品使用：

1.儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的凍干粉置于室溫回溫至少20min，低速離心后，將其溶于有機(jī)溶劑比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的儲(chǔ)存液。將儲(chǔ)存液避光保存在+4℃。

2.ANEP染料的細(xì)胞加載

2.1批量加載

爬片培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞一般通過(guò)將少量的染料儲(chǔ)存液（比如溶于DMSO）加入細(xì)胞培養(yǎng)基（終濃度為0.2-2μM）進(jìn)行標(biāo)記即可。更高的染料濃度（10-50μM）用于標(biāo)記灌注的組織樣本。通常要加0.05% Pluronic?F-127（貨號(hào)：NBS2009）在標(biāo)記溶液內(nèi)，以提高染料的溶解（對(duì)于親脂性更高的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能省略）。低標(biāo)記溫度（4-20℃）能抑制染料的內(nèi)在化。含探針的溶液孵育10-20min，細(xì)胞用不含染料的培養(yǎng)基清洗3次。

2.2逆行標(biāo)記

特定的神經(jīng)元群細(xì)胞可通過(guò)定位壓力注射高濃度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）進(jìn)入神經(jīng)組織來(lái)實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。

2.3微注射

微電極尖端裝有3mg/ml（5.5mM）的Di-2-ANEPEQ水溶液，用于壓力微注射進(jìn)入神經(jīng)元。在裝載進(jìn)入電極前需立即過(guò)濾溶液以去除微小顆粒，防止阻塞電極尖端。

3.熒光測(cè)定

一般通過(guò)記錄激發(fā)在450nm和510nm，發(fā)射在＞570nm處的熒光強(qiáng)度來(lái)進(jìn)行熒光比率成像測(cè)定。當(dāng)膜超極化，熒光強(qiáng)度比率（F450/F510）降低。電位響應(yīng)的校準(zhǔn)可通過(guò)使用離子載體纈氨霉素和添加不同鉀離子濃度到細(xì)胞外培養(yǎng)基來(lái)調(diào)整多種膜電位來(lái)實(shí)現(xiàn)。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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