Tetramethylrhodamine Ethyl Ester (TMRE)

 【溫馨提示】：見我司整理的膜電位熒光探針產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡介：

帶正電荷的羅丹明染料（比如羅丹明酯）選擇性定位在線粒體，因此，普遍用來標記活細胞線粒體。除了選擇性標記線粒體外，與JC-1一樣，四甲基羅丹明乙酯（Tetramethylrhodamine Ethyl Ester,TMRE）廣泛用來測定線粒體膜電位。TMRE在細胞膜不會形成聚集物，與膜蛋白的相互作用非常小。因此，該染料的跨膜分布與膜電位直接相關(guān)。TMRE的光譜特性類似于TRITC，使用起來相當方便。

產(chǎn)品特性:

1） CAS NO.：115532-52-0

2） 化學名：3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(ethoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate

3） 同義名：Tetramethylrhodamine ethyl ester perchlorate 四甲基羅丹明乙酯高氯酸鹽；TMR ethyl ester TMR乙酯；

4） 分子式：C26H27ClN2O7

5） 分子量：514.95

6） Ex/Em：549/574nm

7） 純度：≥95%

8） 溶解性：溶于DMSO

9）化學結(jié)構(gòu)圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少一年有效。 

產(chǎn)品使用：

1.儲存液制備

1.1將低溫保存的產(chǎn)品置于室溫回溫至少20min（此步非常重要，請勿忽略操作），低速離心片刻使粉末沉至管底。

1.2對于25mg粉末，往瓶內(nèi)加入4.8548ml高質(zhì)量無水DMSO配制成10mM儲存液；由于TMRE的使用濃度比較低，可再配制一個中間儲存濃度（比如：100μM），比如：取10μl TMRE（10mM）加入990μl DMSO，充分混勻后，即得到100μM的中間儲存濃度。

2.工作液制備

于正式實驗前，用無血清細胞培養(yǎng)基稀釋母液到適宜的工作濃度，比如：100nM。根據(jù)不同的實驗用途和細胞類型，TMRE的工作濃度范圍一般在20nM~1000nM，初次使用務(wù)必優(yōu)化獲得最佳工作濃度。工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.染色步驟（以熒光成像為例）

注①：對于熒光成像分析，常用的TMRE工作濃度范圍是50-200nM。

注②：如果需測定某藥物對膜電位的作用，需提前處理細胞，再用探針進行后續(xù)檢測。同時需要設(shè)置藥物未處理組和藥物處理組。

注③：如果需要陽性對照，可選擇FCCP或CCCP，這兩種化合物都是解偶聯(lián)劑，能夠降低線粒體膜電位，從而防止TMRE染色。

3.1 培養(yǎng)細胞。

3.2去除培養(yǎng)基，用生理緩沖液比如PBS清洗1-2次。

3.3 加入新鮮配好的工作液完全覆蓋細胞。

3.4于37℃避光孵育15~45min。

3.5【可選】為了增高靈敏度，用PBS或類似緩沖液清洗細胞1~2次。

3.6 熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進行成像分析。

染色示例（來自文獻）

TMRE fluorescence decay upon FCCP treatment and the effect on (Ca²⁺)c.

(A) The representative micrographs showing a decay in TMRE fluorescence in a single cell after 30 s depolarization with 1 μM FCCP. Scale bar 10 μm.

(B) Representative traces showing average FCCP-induced Fura-2 fluorescence increase due to release of mitochondrial Ca²⁺ in n?=?15, n?=?20, n?=?19 cells for C, _2, _3 lines, respectively.

(C) Representative traces of average Fura-2 fluorescence showing lack of 6 μM oligomycin effect on (Ca²⁺)c in 14 cells.

注意事項：

1.      TMRE適合活細胞染色，但不適合固定細胞染色。

2.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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